细胞分离液快速操作说明和使用及保存中的注意事项：

注意：1，分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果。

2，使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。

3，所有操作过程一定要在无菌条件下进行。

4，*抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂

体积。

A. 小量分离-使用1-2ml新鲜抗凝血，骨髓，脐带血：

1，取新鲜抗凝血1-2ml，与全血及组织匀浆稀释液（Cat#：2010C1119）1:1 混匀；

2，小心加于与混合液等体积的细胞分离液之液面上；

3，以400g（约1500 转/分）离心15 分钟（半径15cm 水平转子）；

此时离心管中由上至下细胞分为四层。*层;为血浆层。第二层；为环状乳白色淋巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含4-5ml 细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以1800 转/分离心20 分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2 次即得所需细胞。

B. 中量分离-使用5-10ml新鲜抗凝血，骨髓，脐带血：

1，取新鲜抗凝血5-10ml，与全血及组织匀浆稀释液（Cat#：2010C1119）1:1 混匀；

2，将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上；（混合液：分离液=2：1）

3，以500g（约1800 转/分）离心15 分钟（半径15cm 水平转子）；

此时离心管中由上至下细胞分为四层。*层;为血浆层。第二层；为环状乳白色淋巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含10ml 细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以1800 转/分离心20 分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2 次即得所需细胞。

C. 大量分离I-使用20ml新鲜抗凝血，骨髓，脐带血：

1， 取新鲜抗凝血20ml 以200g（约1100 转/分）离心20 分钟弃去血浆；

2，向弃去血浆的血细胞中加入全血及组织匀浆稀释液（Cat#：2010C1119）12ml 小心混匀；

3，将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上；（混合液：分离液=2：1）

4，以600g（约2000 转/分）离心15 分钟（半径15cm 水平转子）；此时离心管中由上至下细胞分为四层。*层;为血浆层。第二层；为环状乳白色淋巴细胞

层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含20ml 细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以1800 转/分离心20 分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需细胞。

D. 大量分离II-使用50ml新鲜抗凝血，骨髓，脐带血：

1， 取新鲜抗凝血50ml 与HES-TBD550 液1:1 混合后再与1 份注射用生理盐水混匀20±2℃静置30 分钟。吸取混浊的上清液备用，弃去底部红细胞。

2，将步骤1 中留取的上清液以200g（约1100 转/分）离心20 分钟弃去上清保留沉淀细胞；

3，向沉淀的细胞中加入全血及组织匀浆稀释液（Cat#：2010C1119）20ml 小心混匀；

4，将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上；（混合液：分离液=2：1）

5，以600g（约2000 转/分）离心15 分钟（半径15cm 水平转子）；

    此时离心管中由上至下细胞分为四层。*层;为血浆层。第二层；为环状乳白色淋巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含20ml 细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以1800 转/分离心20 分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2 次即得所需细胞。