抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清，一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。

抗血清的制备过程：

一、材料：

1、金属编号牌（对动物作标记录）或染料；

2、1毫升，5毫升、20毫升注射器；

3、*头（9#，12#），卡价苗针头（41/2 # — 51/2 #）；

4、灭菌平皿，疫苗瓶，*瓶，皮塞以及吸管，脱脂棉；

5、卡介苗（75mg/ml）；

6、抗原（小鼠血清）；

7、*溶液，*溶液和5%葡萄糖溶液；

8、液体石腊（医用），羊毛腊（配制佐剂用）；

9、灭菌生理盐水，消毒用酒精，2.5%碘酒；

10、1.5%琼脂，玻板，饭盒（保湿、保湿作用）；

11、实验动物（家兔）。

二、步骤

1、动物的选择

羊、马、鸡、猴、豚鼠、兔都是常用的免疫动物，在实验中，选择动物时应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及动物个体等因素。免疫用动物应选适龄、健壮．为雄性。zui常用的实验动物是家兔，一般选择选择年龄在6个月以上当年繁殖的♂性，体重2 ～3公斤，健康家兔三只，免疫前用金属编号牌固定兔耳，或用染料涂沫在动物的背部，作出明确的标记。

2、抗原制备

抗原乳剂的制备：其方法一般有两种，其一，将等量的*佐剂（注意佐剂必须预先加热融化，但不超过50℃）和抗原溶液分别吸入两个5ml注射器内，在两个注射器的12# 

针头间套上一根长约8～12cm的医用无毒塑料管，将两个注射器连接在一起（塑料管必须先经酒精浸泡消毒，使用时取出，用灭菌生理盐水冲洗后，与注射器针头相连接，塑料管与针头的口径须合适，不能松，稍紧些为宜），针头插进塑料管约1～2cm然后由两人相对而坐后缓缓推动针蕊，使管内溶液进入塑料管道至对侧注射器内，每次推动针蕊时必须把管内容物全部推出，另一侧也同样操作，使管内液体往返混合，直至形成油包水乳剂（Water-in-oil enulsion）为止。

其二是，将等量的佐剂和抗原溶液倒入钵内，经过反复碾磨，也可形成油包水乳剂，该法主要优点是快速，可靠，不足方面主要是由于粘附过多，浪费佐剂及抗原。

制成的乳剂是否形成油包水乳剂直接影响免疫效果，因此，必须进行质量检查，检查的方法是将制成的乳剂滴一滴在凉水（自来水）表面，质量合格的乳剂滴入水面保持滴珠完整而不分散，不合格者进入水面后立即扩散，水面油亦逐渐扩大，这就必须要继续操作至质量合格为止。

3、免疫途径，剂量和免疫周期

抗原注射途径可根据不同抗原及试验要求，选用皮内、皮下、肌肉、静脉或淋巴结内等不同途径注入抗原进行免疫。一般常采用背部、足掌、淋巴结周围、耳后等处皮内或皮下多点注射。初次免疫与第二次免疫的间隔时间多为2～4周。常gui免疫方案为抗原加CFA皮下多点注射进行基础免疫；再以免疫原加IFA作2～5次加强免疫，每次间隔2～3周，皮下或腹腔注射加强免疫。

4、试血，测定抗体效价

一般在第三次免疫后7～10天即可于兔耳静脉或小鼠尾尖取少量血，分离出血清之后进行试血。

• 环状试验，较为经典的方法，目前较少采用，如与20μg/ml以下的抗原于30 min内能出现的沉淀环，即测定抗体效价达1：5000以上时为合格。
• 免疫双扩散法，这是zui常用的试血方法，其具体方法是，中间孔加稀释的抗原（1mg/ml）10μl，周围孔顺时针方向加制备的抗血清分别为1:2, 1:4, 
• 1:8，1:16，1:32和1:64，（用生理盐水或PBS稀释）。经37℃保温24h后观察结果，效价在1:16以上即可决定放血。

5、放血

经效价检查合格后即可放血。放血前动物应停食12 h，以减少血清中的脂肪含量。如拟保留该免疫动物，可直接由心脏取血，或切开耳缘静脉滴血或心脏穿刺取血。取血后由静脉缓缓注入等量5%葡萄溶液以补足失血量。取血的动物经2～3个月休息，可再次加强免疫后取血。

6、分离血清

必须在无菌条件下进行，待收集于平皿或三角瓶内的血液凝固之后，用无菌滴管在无菌环境（例如超净工作台）中把血kuai与瓶壁剥离后，放入37℃，1～2h取出后放入4℃过夜，使血清充分析出（不能冰冻，否则产生溶血），经离心沉淀分出血清，放进低温冰箱保存。使用前必须经过签定合格后再分装保存备用。

7、抗血清的保存

1）经签定合格后的抗血清，以1:100比例加入1%的硫柳汞或5%的叠氮钠，使其zui后浓度分别为0.01%或0.05%。

2）用无菌滴管将抗血清分装小管，每管装1ml左右。

3）-20℃以下保存，可保存2年以上。

4）如有条件可将血清冷冻干燥保存于4℃以下，保存时间更久