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H522细胞(说明书索取) 技术文章:
由于质粒可以复制扩增,相比起化学合成来说,这就能够显著降低制备siRNA的成本。因为质粒的价钱大约是3000多人民币,还不到化学合成1条21nt的RNA价格的一半,但是就可以自行制备siRNA而不受数量的限制。
在这里为大家介绍几种不同的siRNA合成质粒,但是大家要注意的是这里介绍的siRNA质粒是不同于体外转录合成RNA的质粒,因为这里制备的是用于哺乳动物细胞实验的siRNA,而不是长链的RNA(长链的dsRNA不适宜用在哺乳动物细胞
因为会引发非特异抑制pSilencer siRNA 表达载体系列是用于在培养的哺乳动物细胞中表达siRNA的一系列载体。
在载体上包含有RNA聚和酶III (Pol III)启动子,氨苄抗性基因和大肠杆菌复制子,只要将编码一小段对应目的基因特异序列的、其RNA能形成发夹结构(就是回文结构)的DNA序列插入载体中Pol III 启动子的下游,转入哺乳动物细胞,载体就能表达出发夹结构的RNA,这种RNA很快在细胞中加工成为siRNA。
这些表达载体已经成功的在Hela细胞中抑制了包括Cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内的多个基因的表达。实验表明:能够被化学合成或者体外合成的siRNAs抑制的基因同样可以被表达相同序列的载体生成的siRNAs抑制。
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