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[yi蛋白酶消化] :(加消化液-观察细胞-弃消化液-加入培养液)
具体步骤:
1.将旧培养液小心吸出,用PBS冲洗(清洗),加入消化液(适量加入,量以盖住细胞),消化温度37℃。
2.倒置显微镜下观察消化细胞,如果胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.弃去yi蛋白酶液,更换吸管,加入新鲜培养液。
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[明胶溶液] :
明胶难于过滤,必须用无菌的PBS配制0.1%明胶溶液。制备过程中注意无菌操作。
注意:即使是01.的溶液,明胶也难溶,因此要充分摇匀,过ye放置.
保存:无菌分装入50ml小瓶中,4℃保存。
明胶溶液注意事项:
1.溶液配制须用新鲜蒸馏水。
2.RPMI1640培养基配制时要加入小牛血清,因小牛血清略偏酸性,可在配制时调PH至7.4,保证培养液PH值zui终为7.2,
3.安装蔡式滤器,使用孔径0.45微米滤膜一张、0.22微米滤膜一张,放置位置为0.45的位于0.22微米的滤膜上方,滤膜光面朝上。
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