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南京金益柏生物科技有限公司
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阅读:167发布时间:2017-8-23
ELISA夹心法应该如何操作?在选择抗体的时候,选择一个单抗和一个对抗配对,若是选择两个单抗,必须识别不同表位的抗体,是用同一家公司同一批次的。
ELISA夹心法应该如何操作图片
一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
标准品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
ELISA实验中为了确定*信号和zui低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
为了优化灵敏度,建议过夜孵育标准品和标本。
若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig。
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