人血小板活化因子（PAF）ELISA试剂盒如何操作
上海研盟生物推荐操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
20 ng/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
10 ng/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
5 ng/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2.5 ng/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
1.25 ng/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl， 然后再加待测样品 10µl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。人血小板活化因子（PAF）ELISA试剂盒如何操作
人血小板活化因子（PAF）ELISA试剂盒检测范围：0.6ng/L - 20ng/L
使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中血小板活化因子（PAF）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血小板活化因子（PAF）水平。用纯化的人血 小板活化因子（PAF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血小 板活化因子（PAF），再与 HRP 标记的血小板活化因子（PAF）抗体结合，形成抗体-抗原酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色， 并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的血小板活化因子（PAF）呈正相 关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人血小板活 化因子（PAF）浓度。
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