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上海研盟生物科技有限公司
上海研盟生物科技有限公司
上海研盟生物提供美国ATCC传代细胞株“HeLa细胞培养方法"，进口来源，国内保种，活性保证，咨询：.
【友情提示】：产品价格与说明书请添加客服或来电询价，索要说明书；
产品名称：HeLa细胞培养方法
细胞特性
组织来源：腺癌
培养条件：MEM +10% FBS
形态：贴壁；上皮细胞样
含量：>1x10的6次方 个/mL
污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
基本特性：
描述：（1）所有细胞株购自ATCC；
（2） 公司可提供新鲜或冻存细胞株；
（3） 细胞株数量约 1000000个/瓶；
（4） 不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
密度超过90%,并且细胞状态很好时,则复温后2个小时需要立即传代，提供复苏好的细胞株，贴壁及悬浮细胞形式，细胞状态良好，饱满、光泽度好，*，并提供细胞报价、所需培养基、种属来源、组织来源、形态、背景资料等。
客户在收到细胞时，请首先观察培养瓶是否完好，培养液是否外渗，培养液是否混浊。如发现有瓶破、渗漏、培养液混浊等问题，请在收到细胞后立即与我们，
由于运输过程中的问题，我们公司一般采用胎牛血清保存的方式进行运输。我们公司细胞生产部门会将培养好的10的6次方个细胞加1.5ML血清，放入2ML冻存管内。你在收到细胞后。请用培养基重悬放入培养瓶，置于二氧化碳培养箱内过夜。并于次日 在显微镜下观察。此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按本注意事项第3项下悬浮细胞的方法处理；如台盼蓝染色证实细胞无活力，请在收到细胞48小时内并将细胞状态照片及台盼蓝染色后的照片发至我们。我们将尽快帮你解决。
细胞用途：仅供科研使用。
HeLa细胞培养方法复苏方法
1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。
2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。
3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。
4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。
5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。
我公司认为购买细胞的客户有培养细胞的经验，客户收到细胞，原瓶里的培养液可以收集继续使用，在*次消化传瓶时，我们要求客户留一瓶细胞继续使用我们的培养液，其它瓶的细胞客户可使用自己的培养液，这样可减少由于细胞不适应培养液导致的细胞问题。
来源有保障（世界*品牌），状态且传代次数好，经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。每管含有细胞数>1000000个，具有高品质、高纯度、高稳定性等特点，纯化技术保证产品性能。
运输方式：活细胞运输（T-25 flasks）。
细胞纯度：95%。
细胞来源：ATCC等。
包装：内层无菌自封袋，防压泡沫盒，外层防压保温气泡袋，说明书。
用途：本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于治疗等其他方面。
细胞冻存
１．将细胞消化下来，移入离心管离心，弃上清
２．准备冻存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培养基＋１０％ＤＭＳＯ（现用现配）
３．加１．５冻存液在离心管中，将细胞吹打均匀，移入冻存管内．
放入－２０度冰箱２－４小时后．再放入－８０度冰箱过夜，第二天放入液氮罐保存.
，体内、外细胞的差异和分化：
1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。
2、分化：体外培养的细胞分化能力并未*丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内不同。细胞是否表现分化,关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。
注意事项
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO，货号11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。
4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，zui后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至zui终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
传代时间：2-3天 3-5天
传代比例：1:2~1:3 1:1~1:2
细胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞实验安全性：所有细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下(是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。
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