江苏菲亚生物科技有限公司

微藻基因组提取的方法概述

时间:2017-1-16阅读:483
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微藻基因组提取的方法主要有以下几种:

1、采用CTAB法

2、收集藻体

3、液氮研磨

4、加入CTAB提取液

5、*抽提、乙醇沉淀

6、洗涤

   一般来说,液氮研磨是的方法。原因如下:

1、液氮冷冻使得藻体变脆,易于破碎。

2、液氮研磨的力度,一般不会对基因组DNA造成机械损伤。

3、在低温下,各种酶包括核酸酶的活性较低,可以zui大程度防止核酸的降解,这点在制备RNA的时候,尤为重要。所以,在制备微藻基因组时,应该尽量用液氮研磨。

    当然,用液氮往往比较麻烦;并且有潜在的危险,所以在某些情况下,也可以用一些替代性的方法,主要分为三类:

*类、常温研磨。即用玻璃匀浆器或者组织匀浆机来破碎细胞,但需要做一些与实验来确定研磨的时间/力度。

第二类、酶解。即用针对于研究对象细胞壁成分的酶,来酶解细胞壁,进而达到破碎细胞的目的。常用的酶有果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶、*、海螺酶、蜗牛酶以及DRISELASW 崩溃酶,同样需要做预试验确定酶的种类和用量,以及酶解时间。

第三类、使用强的裂解液。例如异硫氰酸胍等,经过长时间浸泡,可以“溶解”藻细胞。

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