PK-15细胞低血清培养：

一、PK-15细胞低血清培养：

1、细胞形态

    在方瓶中使用低血清培养基（MD611）逐代降低血清使用量，进行细胞的低血清驯化适应，在低血清培养状态下，细胞具有清晰的轮廓、立体感较强，细胞更致密，与原培养液的细胞形态无差异。

2、细胞增殖情况

    PK-15细胞以一定接种密度（3-4×104个/cm2）接种方瓶进行连续传代，3d左右细胞可形成单层或致密单层，需及时传代。如下图所示，使用低血清培养基+5%NBS培养的细胞与DMEM+10%NBS培养的增殖速率基本无差别，细胞3d可增殖6-7倍，细胞数可达2×107个/T75。

二、MD611低血清培养基的配制方法：

    MD611培养基不同于传统的培养基，培养基的正确配制和使用方法影响细胞的培养效果，应严格按使用说明书配制使用。以50L/包规格低血清培养基为例，应按以下程序配制培养基。

1.打开培养基包装，将培养基全部倒入一容器中。

2.用少量冷却注射用水（20℃～30℃）涮洗袋内残留培养基，倒入容器内。

3.向容器中加入约40L冷却注射用水（20℃～30℃），搅拌至培养基*溶解。

4.按使用说明书标示量加入114.5克*，搅拌至*溶解，补加冷却注射用水（20℃～30℃）至50L，充分混合，用pH计检测，溶液pH应为7.2～7.4。

5.按使用量加入血清和抗生素，混合均匀，用0.22μm滤膜正压过滤除菌。

6.除菌后培养基，置2℃～8℃避光保存。

三、MD611低血清培养基一些注意事项：

1.不可配制成浓缩液储存使用。

2.不可用高压湿热法进行灭菌。

3.不可冷冻储存，再溶解使用。

4.不可常温储存，2～8℃储存。

5.该培养基中已含*，由于*不稳定，易分解，产生对细胞敏感的毒性物质，故加入血清的*培养液应尽快使用完毕。

6.该培养基中所含指示剂酚红的量是常规量的一半，故从外观上看所配溶液颜色较浅，判定pH时，建议用pH计测定pH。

     以上是我们公司总结的经验，为客户提供来样检测服务，zui大限度实验结果的有效性（费代测），可以享受本公司完善的售后服务和。