大鼠髓过氧化物酶（MPO）ELISA试剂盒 返回列表页

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大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒血清样本采集和检测注意事项：
血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。
一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清
融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。

大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒实验测定具体步骤：
1．确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目，并增加 1 孔作为 TMB 空白显色孔。 总数=样品数+9；做双份检测时×2。其余重包装好放如冰箱中。 
2．将标准品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加样品稀释液的作为零孔。对于血清、体液、 组织匀浆或细胞培养上清，直接加已用样品稀释液稀释的样品 100μ ι 。 
3．酶标板加上盖，37℃反应 90 分钟。 
4．反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。 不洗。 
5．将准备好的*抗体工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白显色孔除 外）。37℃反应 60 分钟。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗涤 3 次，每次浸泡 1 分钟左右。 
7．将准备好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白显色孔除外）。37℃反应 30 分钟。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗涤 5 次，每次浸泡 1-2 分钟左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分钟的 TMB 显色液，37℃避光反应 20-25 分钟 （注意：显色时间供参考，因用户实验室条件差异，显色时间会有所不同。此时肉眼可 见标准品的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色，后 3-4 孔差别不明显）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 终止液，此时蓝色立转黄色。 
11．用酶标仪在 450nm 测定 OD值。