大鼠25羟*3（25（OH）D3/25 HVD3）ELISA试剂盒 返回列表页

大鼠25羟*3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA试剂盒

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操作方法：

一、双抗体夹心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。

2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

二、间接法

1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；

2.次日洗涤3次；

3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；

6.zui后一遍用DDW洗涤。

其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。

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标本收集: 血清：全血标本于室温放置2小时或4℃后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。血浆：抗凝剂*使用EDTA，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃电冰箱内，避免反复冻融，6个月内进行检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 如果样本中检测物浓度高于标准品zui高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。
酶标仪(450nm波长滤光片)高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水。