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Cyanine5-NHS ester的使用方法及操作步骤
西安凯新生物科技有限公司可为您提供zui全的Cyanine系列的活性荧光染料，其中Cyanine5-NHS染料可分为脂溶性的和连接磺酸基的suflo-Cyanine5-NHS ester的水溶性染料，订购：
1、 称取 0.1-0.5g 植物组织（如果是叶片，一般用 0.2g 即可；如果是含水分多的 果实，一般用 0.3-0.5g；如果是种子，一般用 0.1g 即可），放入液氮中研磨 成粉末。
2、 加入 1 mL 溶液 A，在冰上继续研磨至成糊状。注意：如果样品富含蛋白酶， 还可以在溶液 A 中加入相应的蛋白酶抑制剂（自备）。
3、 将研磨液转移到一个干净的 1.5mL 塑料离心管中，颠倒混匀后 4℃ 15000g 离心 15 分钟。
4、 将上清液转移到一个新的 1.5mL 塑料离心管中。
5、 加入 100 uL 溶液 B，颠倒混匀。
6、 在冰上放置 15 分钟或在-20℃冰箱过夜。
7、 4℃ 15000g 离心 15 分钟，小心移弃上清液。
8、 向沉淀物加入 1mL -20℃预冷的溶液 C，震荡混合。
9、 4℃ 15000g 离心 10 分钟，移弃上清液。
10、重复步骤 8 和 9 一次
11、加入 1mL -20℃预冷的溶液 D，震荡混合后 4℃ 15000g 离心 10 分钟，去 净上清液。
12、冷冻干燥 1~2 分钟，沉淀即可放冰箱保存或加入 200uL 自备的等电聚焦上样 液在室温下（温度不要超过 30℃）溶解 30 分钟，再室温 10000g 离心 2 分 钟，将上清液转移到一个新的 1.5mL 塑料离心管中。后续试验包括 Bradford 蛋白定量和 2D 电泳。2D 电泳对蛋白上样量要求十分严格，因此强烈建议用 户在进行 2D 电泳前测定所得蛋白的浓度。
