靶向标志物GPC3（Glypican3）荧光纳米探针合成路线
GPC3是在研究过度生长综合症（Simpson-Golabi-Behmel syndrome，SGBS）时发现的蛋白聚糖家族成员。GPC3基因位于人X染色体上（Xq26.1）。它的启动子区包括6个SPI结构、7个AP2结构和2个CAAT盒，产生2 130 bp的转录子，编码含580个氨基酸残基的GPC3蛋白质前体。GPC3核心蛋白相对分子质量约为70 ku，它富含一段包括14个半胱氨酸残基的*序列，中间为furin蛋白酶切位点。Furin蛋白酶裂解Arg358和Cys359形成40 ku的N末端亚基和30 ku的C末端亚基。在N末端有一种分泌型信号蛋白，C末端通过与糖基磷脂酰肌醇共价结合而锚定于细胞膜上，且硫酸乙酰肝素链插入点的位置均由C端zui末50个氨基酸所决定，使该链靠近细胞膜。
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越来越多的研究表明GPC3可用于HCC常规组织检查和潜在治疗靶点，靶向肿瘤标志物GPC-3的荧光纳米探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）制备以ZnS为壳层的核壳结构量子点；
（2）取2~10ml的以ZnS为壳层的核壳结构量子点溶液超生分散，15000rpm转离心30~50min，加超纯水0.5ml，备用；
（3）取5~20mg的碳化二亚胺（EDC），1~10mgN-羟基硫代琥珀酰亚胺（NHSS）加水1.0ml溶解；
（4）取上述溶液0.3~1.0ml加入以ZnS为壳层的核壳结构量子点溶液中，定容至1.0~5.0ml，37℃摇床反应1~2小时；
（5）15000rpm高速离心30~50分钟，弃上清，用pH8.5的PBS溶液250~1000μl重新溶解；
（6）加5~20μl的靶向GPC-3的单抗GC-33溶液，37℃的恒温下，摇床反应2~3小时，将单抗GC-33修饰到以ZnS为壳层的核壳结构量子点的表面；
（7）15000rpm离心30~50分钟，溶于pH7.2的PBS溶液中，分离提纯得到靶向肿瘤标志物GPC-3的荧光纳米探针（GC-QDs）。
其中，所述步骤（1）中的以ZnS为壳层的核壳结构量子点为ZnO/ZnS。
本发明的上述技术方案的有益效果如下：
1.本发明中核壳结构的量子点载体的合成方法避免使用三辛基膦（TOP）或磷酸三丁酯（TBP）等危险试剂，安全、环保，并且步骤简单，成本低廉。
2.本发明通过改进合成方法和核壳的结构比率等，可制备一系列不同粒径和结构比例的核壳结构的量子点，实现量子点在可见-近红外区内实现荧光可调，具有更好的荧光发光性质，并且通过ZnS的壳层修饰降低或者消除了内核量子点的生物毒性，使其具有更好的生物安全性。
3.本发明通过将GC-33修饰到量子点的表面制备得到高特异性、高靶向性的纳米探针，通过克服生物组织对荧光干扰的影响，实现对肝癌的原位、活体标记与成像，为荧光量子点的临床应用提供实验基础和理论研究。
4.按照本发明提供的技术方案所制备的GC-QDs纳米探针，还可作为载体在制备靶向纳米复合药物中应用。
