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Millipore超滤离心管的选择、应用及使用方法
2018-3-12 阅读(4316)
Amicon Ultra离心超滤管
- 高回收率 Ultracel 再生纤维素膜具有一系列截留分子量
- 高回收率> 90%
- 垂直结构的膜减少了浓差极化，加快离心速度，快达 5 分钟
- 热密封膜将下游溶出物污染可能性降到zui低
- 100% 完整性检测确保性能可靠
- 透明外壳和体积刻度方便样品察看
- 直接吸取样品减少处理步骤
- 高浓缩倍数：80–100 倍
应用：
- 生物样品浓缩：包括抗原、抗体、酶、核酸或微生物
- 组织培养提取物或细胞裂解液中大分子组分的纯化
- 对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩
- 脱盐和缓冲液更换
典型蛋白质回收：
产品信息：
改进了垂直膜的设计，Amicon Ultra-0.5系列性能更好，离心时间更短
| 货号 | 产品 | NMWL，kDa | 包装数量 |
| UFC500396 | 超滤管[0.5ml 3KD] | 3 | 96 |
| UFC501096 | 超滤管[0.5ml 10KD] | 10 | 96 |
| UFC503096 | 超滤管[0.5ml 30KD] | 30 | 96 |
| UFC505096 | 超滤管[0.5ml 50KD] | 50 | 96 |
| UFC510096 | 超滤管[0.5ml 100KD] | 100 | 96 |
Amicon Ultra-4系列，用于浓缩物体积 1–4mL 的装置
| 货号 | 产品 | NMWL，kDa | 包装数量 |
| UFC800396 | 超滤管[4ml 3KD] | 3 | 96 |
| UFC801096 | 超滤管[4ml 10KD] | 10 | 96 |
| UFC803096 | 超滤管[4ml 30KD] | 30 | 96 |
| UFC805096 | 超滤管[4ml 50KD] | 50 | 96 |
| UFC810096 | 超滤管[4ml 100KD] | 100 | 96 |
Amicon Ultra-4 超滤管超滤管使用离心管和盖装配。
Amicon Ultra-15系列，用于浓缩物体积 <15 mL
| 货号 | 产品 | NMWL，kDa | 包装数量 |
| UFC900396 | 超滤管[15ml 3KD] | 3 | 96 |
| UFC901096 | 超滤管[15ml 10KD] | 10 | 96 |
| UFC903096 | 超滤管[15ml 30KD] | 30 | 96 |
| UFC905096 | 超滤管[15ml 50KD] | 50 | 96 |
| UFC910096 | 超滤管[15ml 100KD] | 100 | 96 |
Amicon Ultra-15 超滤管超滤管使用离心管和盖装配
超滤管使用方法和注意事项
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号 的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。
1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，zui常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、 5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤 管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量*过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至zui低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法*时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为 止。
5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再 浓缩至1ml左右，连续三次，zui后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍 左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出zui终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的zui后一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。zui后加入MilliQ水到超滤管中，没过 超滤膜，防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将 管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用 MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。
