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上海钰博生物科技有限公司
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阅读：241发布时间：2017-5-9
微生物染色液配制及染色法
2.1 美蓝染色法
2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液
美蓝 0.3g
95%乙醇 30mL
0.01%氢氧化钾溶液 100mL
将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。
2.1.2 染色法
将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。
2.1.3 结果
菌体呈蓝色。
2.2 革兰氏染色法
2.2.1 结晶紫染色液
结晶紫 1g
95%乙醇 20mL
1%草酸铵水溶液 80mL
将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
2.2.2 革兰氏碘液
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300mL
将碘与碘化钾*行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待*溶解后，再加蒸馏水至300mL。
2.2.3 沙黄复染液
沙黄 0.25g
95%乙醇 10mL
蒸馏水 90mL
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
2.2.4 染色法
2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。
2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。水洗，待干，镜检。
2.2.5 结果
革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。
注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)
2.3.1 石炭酸品红染色液
碱性品红 0.3g
95%乙醇 10mL
5%酚水溶液 90mL
将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。
2.3.2 3%盐酸－乙醇
浓盐酸 3mL
95%乙醇 97mL
2.3.3 复染液
吕氏碱性美蓝染色液。
2.3.4 染色法
2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切 不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。
2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。
2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s～1min，水洗，待干，镜检。
2.3.5 结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。
2.4 柯氏染色法
2.4.1 染色液
2.4.1.1 0.5%沙黄液。
2.4.1.2 0.5%孔雀绿液。
2.4.2 染色法
2.4.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约2～3min，水洗。
2.4.2.2 滴加0.5%孔雀绿液，复染40～50s。水洗，待干，镜检。
2.4.3 结果
布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。
2.5 奥尔特氏荚膜染色法
2.5.1 染色液
沙黄 3g
蒸馏水 100mL
用乳钵研磨溶解。
2.5.2 染色法
将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染3min。水洗，待干，镜检。
2.5.3 结果
炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。
2.6 瑞氏染色法
2.6.1 染色液
瑞氏色素 0.1g
甲醇 60mL
用乳钵研磨溶解。
2.6.2 染色法
2.6.2.1 涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min。
2.6.2.2 加入等量蒸馏水(pH6.5)，染色3～5min。
2.6.2.3 用蒸馏水冲洗，待干，镜检。
2.7 鞭毛染色法
2.7.1 染色液的配制
2.7.1.1 甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。
2.7.1.2 乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。
在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止(此为关键性操作，应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，2～3d基本无效。
2.7.2 染色法
在风干的载玻片上滴加甲液，4～6min后，用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
2.8 碱性复红染色法
将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时，可用滤纸过滤，或静置后取上清液备用。
注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色，藉以与蜡样芽胞杆菌相区别
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