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江苏菲亚生物科技有限公司
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小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的测定方法
2018-4-4 阅读(1148)
染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然在细胞质中。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。
实验方法与步骤：
（1）环磷酰胺处理：取骨髓前24h先给小鼠腹腔注入环磷酰胺，注射剂量为100mg／kg动物体重。
（2）取骨髓：用损伤脊髓法处死小鼠，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出大腿骨，用一小块纱布来回搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后用注射器吸取5ml生理盐水，插入股骨一端，将骨髓细胞冲洗至10ml的离心管中。可重复冲洗多次，直至骨髓腔呈白色为止。
（3）离心处理：将所获得的细胞悬浮液以 1000rpm离心10min，吸去上清液，在沉淀物中加入2滴灭活的小牛血清，制成细胞悬液。
（4）涂片：滴一滴悬液于载玻片一端，按常规方法涂片，在空气中晾干。
（5）固定：将晾干的载玻片放入甲醇固定液中10min，取出晾干。
（6）染色：将制片平放在玻璃板上，用1∶9∶10的 Giemsa∶PBS∶瑞氏染液，染色15min，流水冲洗后晾干即可镜检。
（7）观察：嗜多染红细胞为年幼红细胞，呈灰蓝色，略大于红细胞（红色），微核多呈圆形和椭圆形，呈蓝紫色或紫红色（图13-3）。
（8）结果分析：在显微镜下，每只小鼠骨髓涂片标本计数1000~2000个嗜多染红细胞，包括其中出现微核的细胞数，将结果填入表内，并计算微核细胞率，观察记录结果（表13-2）。按100mg/kg体重剂量给小鼠腹腔注射环磷酰胺，其嗜多染红细胞微核率为（48.9±3.6）％。正常小鼠嗜多染红细胞微核率为5‰以下，超过5‰为异常。
