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江苏菲亚生物科技有限公司
主营产品： 转化生长因子 elisa试剂盒,植物叶酸 elisa试剂盒,猪蓝耳(PRRS)elisa kit |
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ELISA试剂盒诊断牛副结核病的实验方法
2018-5-14 阅读(1052)
一、ELISA试剂盒诊断牛副结核病的操作方法
1、血清处理 取待检血清、参考阳性血清、参考阴性血清各0.10ml，加生理盐水0.80ml，加草分枝杆菌吸收抗原0.10ml，混匀，37℃感作1h.取0.10ml，ELISA试剂盒加血清稀释液0.90ml（注意血清稀释液中加牛血清白蛋白，不加犊牛血清）。混匀即可
2、抗原包被 以抗原稀释液将副结核亲和层析抗原稀释至50µg/ml,每孔包被0.1ml.部分对照孔以牛血清白蛋白（50µg/ml）包被。
3、正式试验 按表12－4进行。每个样品加2孔，以求OD平均值。
二、ELISA试剂盒诊断牛副结核病的材料与试剂
1、牛副结核病参考阴性血清
2、草分枝杆菌吸收抗原
3、兔抗牛IgG酶标抗体
4、牛副结核病参考阳性血清
5、试剂及溶液配制同第五节猪瘟ELISA。
1～5项均由单位供应。
6、器材ELISA板，酶联免疫吸附检测仪、加样器、洗瓶、恒温箱等。
7、副结核分枝杆菌亲和层析抗原
三、ELISA试剂盒诊断牛副结核病的结果判定
在对照组成立的前提下， 即参考阳性血清呈棕黄色，参考阴性血清及其它对照孔呈无色或浅黄色， 判定待测结果。
1、酶标仪判定（490nm） 以底物溶液对照孔调零，校正参考阳性血清OD值为1.0（或相应规定值），测定待检孔。当OD≥0.50，判ELISA阳性（＋）；0.40≤OD≤0.49判ELISA可凝（±）；OD<0.40，判ELISA阴性（－）。
2、目测判定 与参考阳性血清孔颜色相当，即呈棕黄色，判为ELISA阳性（＋）。
