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江苏菲亚生物科技有限公司
主营产品： 转化生长因子 elisa试剂盒,植物叶酸 elisa试剂盒,猪蓝耳(PRRS)elisa kit |
公司信息
ELISA检测试剂盒新手入门的使用技术报告
2018-8-21 阅读(816)
◎ELISA方法原理
1.双抗体(原)夹心法：检测抗原(体)的常见方法，应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原(适用于二价以上抗原，不能测 小分子半抗原)。
2.间接法：检测抗体的方法，利用酶标记的抗抗体(第二抗体)检测已与固相抗原结合的抗体。
3.竞争法：检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。
◎操作注意
① 使用干净的塑料容器配置洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
② 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
③ 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
◎ELISA试剂盒质控分析
1.人员培训内容包括：①检验项目的基本原理(ELISA试剂盒原理)；②熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成，包被片段及其组成)；③熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识；④某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。
2.基本了解
① 1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA试剂盒技术。
② 特点：ELISA试剂盒在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"。
③ 酶标记免疫活性物质，进行信号放大；
④ 有二步温育反应二次洗涤过程；
⑤ 灵敏度特异性相对较高。
⑥ 局限性：只能检测到ng*平
⑦ 精密度差(批内CV15-20%)；
⑧ ELISA检测试剂盒线性范围窄(一个数量级)；
⑨ 存在"HD-HOOK"效应。
