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江苏菲亚生物科技有限公司
主营产品： 转化生长因子 elisa试剂盒,植物叶酸 elisa试剂盒,猪蓝耳(PRRS)elisa kit |
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小鼠ELISA试剂盒实验操作方法
2019-1-31 阅读(1383)
实验开始前，各ELISA试剂盒均应平衡至室温，试剂不能直接在37 溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加标准品或待测样品100 ，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100 (临用前配制)，酶标板加上覆膜，37 温育1小时。
3.弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400 /每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4.每孔加检测溶液B工作液(临用前配制)100 ，加上覆膜，37 温育1小时。
5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6.每孔加底物溶液90 ，酶标板加上覆膜37 避光显色(反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止)。
7.每孔加终止溶液50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色，终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(值)。
