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江苏菲亚生物科技有限公司
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淋巴细胞转化试验技术:形态学检查法
2019-4-8 阅读(1462)
当机体受到抗原的刺激时，T淋巴细胞就可以转化为淋巴母细胞，进一步转化为致敏淋巴细胞。这种转化在一定的程度上代表着机体的细胞免疫功能状态。这种转化也可在体外的T细胞的培养过程中加入适当的刺激原而出现，并表现出形态上的变化。目前常采用PHA诱发的淋巴细胞转化试验作为检查机体细胞免疫的功能状态。具体方法有形态学检查法。
（一）操作方法
1． 于培养瓶内加0.2ml马血，对照组与试验组各做2瓶，试验组均加PHA 30?g；
2．37℃培养72h，每天轻摇1~2次；
3．取出培养瓶，摇散血*，倒入离心管，3 000r/min离心10min，去上清液；
4．用血球泥制备推片，晾干；
5．以瑞氏染液染2min~3min，加等量缓冲液，混匀继续染3min，蒸馏水冲洗后再用姬姆萨染液染2min~3min。加等量缓冲染液感作7min~8min，馏水冲洗，晾干；
6．镜检，观察，计数。
（二）注意事项
1．培养液适pH为7.2~7.4，过酸过碱都会影响细胞的生长而降低转化率。培养液的类型与动物的白细胞有关，如小鼠的淋转试验，用RPMI-1640较好，用199液则不成功。
2．培养时间 以72h~120h转化率较高，超过这个时间，则转化率反而下降。
3．吞噬细胞有时在形态上易与“过渡型"混淆。但巨噬细胞有其固有的特点，核占细胞比较小且偏一边，核染色质浓集，细胞浆呈蓝灰色或红褐色，胞浆内有大小不等的颗粒或吞噬物，且含有大小不等的气泡。
4．涂片要少蘸些细胞，推出尾部来，因淋巴细胞较大，易集中在尾部及边缘。
5．观察淋巴细胞转化，染色不要太浓，以便观察核仁。
6．严格的无菌操作，是淋巴细胞转化试验成功的关键。
