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江苏菲亚生物科技有限公司
主营产品： 转化生长因子 elisa试剂盒,植物叶酸 elisa试剂盒,猪蓝耳(PRRS)elisa kit |
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BCA蛋白质定量试剂盒使用说明
2019-4-30 阅读(3275)
BCA蛋白质定量试剂盒实验原理：
碱性条件下，蛋白质分子中的肽键结构能与Cu2+结合生成紫色络合物，同时将Cu2+还原为Cu+。BCA试剂可灵敏特异的与Cu+结合，形成稳定的有颜色的络合物，562nm处有zui高的吸收值，可在540-595nm测定其吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
BCA蛋白质定量试剂盒简介：
对不同种类的蛋白质检测的变异系数非常小，快速灵敏，稳定可靠，测定蛋白浓度不受绝大部分样品中化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。而且在20-2000μg / mL浓度范围内有较好的线性关系。
BCA蛋白质定量试剂盒使用说明：
1. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温下24小时内稳定。
2. *溶解蛋白标准品，取C液10微升稀释至100微升，使终浓度为0.5mg/mL。原则上，蛋白样品在什么溶液中，标准品应用什么溶液稀释。但我们强烈建议使用三蒸水稀释标准品及样品。
3. 标准品的稀释：标准曲线的浓度范围应在20-2000μg / mL之间。建议使用倍比稀释法；建议取4~6个不同的浓度做标准曲线；建议每个浓度做2~3个复孔。
4. 蛋白样品的稀释：将待测蛋白样品稀释到标准曲线所能检测的范围内。在eppendorf管中对待测蛋白进行稀释，混匀。可用溶解蛋白的液体进行稀释，但我们建议使用三蒸水稀释标准品。
5. 在96孔板各孔中加入200μL BCA工作液，再在每孔中分别加入已稀释好的标准品和蛋白样品各20μL，建议标准品做2~3个复孔。37℃放置30分钟。
6. 测定A562nm处的吸光度值，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。
