背景介绍:CD14 is a single copy gene encoding 2 protein forms: a 50 to 55 kDa glycosylphosphatidylinositol anchored membrane protein (mCD14) and a monocyte or liver derived soluble serum protein (sCD14) that lacks the anchor. Both molecules are critical for lipopolysaccharide (LPS) dependent signal transduction, and sCD14 confers LPS sensitivity to cells lacking mCD14. Increased sCD14 levels are associated with inflammatory infectious diseases and high mortality in gram negative shock. CD14 also appears to be involved in clearance of gram-negative bacteria via its high affinity binding to LPS-LPB complexes.
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中文名称:内毒素受体抗体
英文名称:Anti-CD14 antibody
规格:0.1ml/0.2m
浓度:1mg/1ml
抗体来源:本公司抗体有兔来源和鼠来源等
克隆类型:兔来源为多抗,鼠来源为单抗
产品类型:一抗
内毒素受体抗体,Anti-CD14抗体简单介绍:
别 名:CD14 antigen; CD14 molecule; Lipopolysaccharide receptor; LPSR; Monocyte Differentiation Antigen 14; Monocyte differentiation antigen CD14; Myeloid cell specific leucine rich glycoprotein; CD14_MOUSE; Myeloid cell-specific leucine-rich glycoprotein.
合适的抗体稀释度
抗体的浓度是免疫染色的关键,如果抗体浓度过高,抗体分子过多于抗原决定簇,可导致抗体结合减少,产生阴性结果。此阴性结果并不一定是缺少抗原,而是由于抗体过量,这种现象类似于凝集反应中的前带效应(prozone effect)。因此,必须使用一系列稀释做“棋盘式效价滴定”,检测抗体的合适稀释度,以得到zui大强度的特异性染色和zui弱的背景染色。抗体稀释度应根据:1.抗体效价高,溶液中特异性抗体浓度越高,工作稀释度越高;2.一般讲,应用的抗体稀释度越大,温育时间越长;3.对于抗体与非特异性蛋白的结合,只有高稀释度时才能防止其非特异性背景染色;4.稀释用缓冲液的种类,标本的固定和处理过程等也可影响稀释度,所以合适的稀释度应根据具体情况测定。抗体的稀释主要是指*抗体,因为*抗体中特异性抗体合适的浓度是关键,应用高稀释度*抗体仅高亲和力的特异性染色反应,减少或消除其中交叉抗体反应。
免疫印迹法是一种通过凝胶电泳分离蛋白质并通过电转移把蛋白质转移到吸附膜上。一经蛋白印迹后,即可通过特异性的标记抗体检测到相应蛋白质。
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可用于检测已被SDS化学变性的蛋白。然而,某些特定的抗体不会在一个变性的蛋白质分子上识别其抗原表位,这时需要进行不含SDS的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
蛋白印迹转膜可以通过湿法或半干法进行。在前者,凝胶夹在印迹膜和各种过滤装置中间,然后把整个装置埋进一个装满Tris转移缓冲的电极槽中。在后者,夹在中间的凝胶周围只有少量的缓冲液,然后封闭在电极板之间。虽然半干法转膜较快,但需要很好地拟合各部分的夹层配件,而湿法转膜很少会出现问题,可以尽量保持重复实验结果的*性。此外,如果半干法转膜时间过长,较小分子量的蛋白质可能会从膜上转过。
转膜后,需对膜进行封闭,以减少非特异性蛋白结合,然后进行用一抗孵育膜,以研究感兴趣的目标蛋白。单克隆抗体通常具有更高的特异性;然而许多单克隆抗体产生于某个特定肽段而不是一个天然蛋白质,因此可能无法检测到PAGE所分离的天然蛋白。也可使用多克隆抗体,但易形成较高的背景值。因一抗通常无标记,所以需要一个可以结合在一抗Fc段的标记的二抗,以用于zui后的检测。通常会用酶来标记二抗。酶标记后的印迹可通过化学发光酶底物及放射自显影技术成像。被抗体检测和标记到的蛋白质会出现在图像的暗区。
斑点印迹法类似于免疫印迹法,在膜上检测目标蛋白;但是斑点印迹法中检测的蛋白质不用电泳进行分离。取而代之的是,含有目标蛋白的样品被直接“点”到膜上,这不能做到定量检测,但它可以直接检测某种特定蛋白的有无。例如,斑点印迹法可用于检测蔗糖梯度分离的细胞裂解产物中的某些蛋白质定位。
内毒素受体抗体保存条件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
避免反复冻融,保质期一年。
免疫荧光双重染色荧光双染或多重染色是指将带有不同荧光素标记的抗体孵育在同一张切片上,镜下观察时将不同的颜色组合在一起,将不同的抗原表达情况一起呈现出来,这样分析多个抗原的关联性更客观、更直接。
荧光双染也有直接法和间接法。直接法是使用带有不同荧光素标记的两个抗体同时孵育后观测;间接法需要用到两个不同种属来源的一抗(例如一个鼠源抗体,一个兔源抗体),后面要选择与一抗相对应的二抗同时需要带有不同的荧光素标记(例如FITC标记山羊抗小鼠和Cy3标记山羊抗兔),间接法需要同时兼顾一抗和二抗的种属关系,避免出现相互的交叉反应。
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