ELISA试剂盒常见问题处理
 

出现问题

出现问题的原因

解决办法

曲线
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
OD值不正常
 
 
 
 
 
 
 

试剂盒未回温

试剂盒回温到25℃

温度控制不好

控制正确温度

孵育时间不准确

控制孵育时间

洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加

洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干

阳光直射，对着风直接吹

避风避光

酶标仪的波长错误

酶标仪的波长450nm

抗体的稀释错误

正确的稀释抗体

水质问题

用娃哈哈矿泉水代替

 
白   板
 
 

洗涤液配制错误

正确的配制洗涤液

少加液体（抗体、酶标记物、A液、B液）

正确的步骤加液体

错加液体

 
无 梯 度
 
 

标准品也污染

换标准品点板

OD值不正常

控制温度时间在做一次

人为点板

/

线 性 不 好
 

OD值不正常

控制温度时间在做一次

人为点板

/

回  收  率
 
 
 
 
 
 

 
空白管阳性高
 
 

样本本身就是阳性样本

换阴性样本做回收率

空白管在实验中被污染

实验中防止交叉污染

水质原因

用娃哈哈矿泉水代替

 
 
偏  高
 
 
 
 

添加量不准确

的添加量

添加浓度不适合

添加合适的浓度

取液吹干量多

准确的取液吹干

取到其它相层液体

取需用相吹干

复溶液未稀释或加入量少

正确的稀释复溶液

 
偏  低
 
 
 

添加量不准确

的添加量

添加浓度不适合

添加合适的浓度

取液吹干量少

准确的取液吹干

复溶液稀释错误或加入量多

正确的稀释复溶液

 
 
假阴、阳性
 
 
 
 
 

水质原因

点复溶液验证

用娃哈哈矿泉水代替

实验操作原因
 
 
 

吸取到其它相吹干

准确的取液吹干

离心不*

延长离心时间

样本的污染

更换样本

乳化未处理*

温浴（70℃）处理乳化现象

仪器试剂原因
 

离心管未清洗干净

正确的洗涤器具

有机溶剂的影响

做试剂空白看影响结果

衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质）

更换衍生化试剂

与曲线好坏相关

保证曲线的正常

 
 
金标检测（T）线颜色较浅
 
 

尿液pH偏碱性

用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。

尿样滴加过多

重新测定，尿样按照说明书，控制在2滴

尿液过于混浊

将尿液离心后，取上清液重新测定

 
 
金标质控（C）线不出现
 
 
 
 
 
 

检测卡由于高温、受潮等原因失效

尿样需要重新检测。

过了有效期失效。

该批号的金标应丢弃处理，尿液需要重新检测
 

操作过程中检测卡没有平放，导致液体样品直接冲过检测区

尿样需要重新检测，且检测卡平放于桌面上再加样。

尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质（比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等）

该尿液的检测结果无效

金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线

金标卡上的划痕；胶体金在跑板过程中没有*跑干净而在卡上的痕迹；

该检测卡结果不可信，尿液需要重新检测。

实验重复性不好

操作人员的不一致，取样的不一致，样本数量的多少，加样时间的长短，洗涤条件不一致，加样量不一致

尽量保持的实验一致性
 

分析软件的使用
 

不能设置和保存

正确的设置和保存

如何判断曲线的好坏和分析结果

正确的判断曲线的好坏和分析结果