人血管紧张素Ⅱ受体2抗体(AT2R-Ab)ELISA 试剂盒
包装规格：48T/96T
检测方法：酶联免疫
检测标本：血清、血浆、细胞培养液等
本试剂盒仅供科研使用!
试剂盒组成
名 称 | 96孔配置 12孔×8条 | 48孔配置 12孔×4条 | 备 注 | |
1 | 标准品（500ng/ml) | 0.5ml | 0.5ml | 稀释即用型 |
2 | 酶标包被板 | 1块 | 1块 | 已包被即用型 |
3 | 标准品稀释液 | 3ml | 3ml | 即用型 |
4 | 链霉亲和素-HRP | 6ml | 3ml | 即用型 |
5 | 30x倍浓缩洗涤液 | 20ml | 20ml | 蒸馏水稀释 |
6 | *标记抗体 | 2ml | 2ml | 即用型 |
7 | 显色剂A液 | 6ml | 3ml | 即用型 |
8 | 显色剂B液 | 6ml | 3ml | 即用型 |
9 | 终止液 | 6ml | 3ml | 即用型 |
10 | 说明书 | 1份 | 1份 | 即用型 |
11 | 封板膜 | 2张 | 2张 | 不可反复使用 |
12 | 密封袋 | 1个 | 1个 | 即用型 |
人血管紧张素Ⅱ受体2抗体(AT2R-Ab)ELISA 试剂盒 需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) 。
2. 洗板机（可调注液量，保证每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
3. 超净工作台，生物安全柜，通风柜。
4. 高精度单道加液器（量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
5. 高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl).
6. 37℃恒温箱。
7. 低温离心机。
8. 电冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.
9. 漩涡混合仪，低频振荡器等
注意事项
1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
3． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
4． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
5． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
6. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。
7. 各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
8. 每次试验测定的同时做标准曲线，。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔zui高浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n）。
9. 配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，使用微量振荡器(使用zui低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。
10. 实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。
11. 手工洗板应注意：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
人血管紧张素Ⅱ受体2抗体(AT2R-Ab)ELISA 试剂盒 样本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存或根据存放，时间做相应温度调整，但应避免反复冻融，（由于样本种类过多，每个单位处理方式不一样，本说明书不做详细介绍）。
操作程序
1． 标准品的稀释：（本试剂系统提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：
250ng/ml | （5号标准品） | 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液 |
125ng/ml | （4号标准品） | 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
62.5ng/ml | （3号标准品） | 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
31.2ng/ml | （2号标准品） | 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
15.6ng/ml | （1号标准品） | 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3． 加样:(详细操作流程请客服索要说明书）
4． 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
5． 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6． 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
7． 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8． 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
人血管紧张素Ⅱ受体2抗体(AT2R-Ab)ELISA 试剂盒 结果判断
1. 每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。（若不减零孔值，标准曲线的零孔应相交于Y轴）
2. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。
3．手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。*使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。
4．若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9200。
2. 灵敏度：zui小可检测浓度达，1.05ng/ml。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5 . 回收率：70-110%.
6. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
7. 有效期：6个月
8. 检测范围： 480ng/ml -3.9ng/ml
问题解答
若实验效果不好，请及时对显色结果拍照，保留所用板条及未使用试剂，并妥善保存，然后我公司为您解决问题。同时您也可以参考以下资料：
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
标准曲线差 | 吸取及洗涤不充分 | 充分的吸取及洗涤 |
移液不精确 | 检查和校正移液器 | |
精密度低 | 洗涤不充分 | 按说明书要求充分洗涤和浸泡 |
混匀不充分和吸取试剂不足 | 充分混匀和吸取试剂 | |
重复利用吸头、容器和覆膜 | 使用加样器要更换新的吸头、使用新的容器和覆膜 | |
加样不精确 | 检查和校正移液器 | |
O.D值低 | 每孔加的试剂量不精确 | 校正移液器，精确加入试剂 |
温育时间不正确 | 保证充足的温育时间 | |
温育温度不正确 | 试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度 | |
酶标记物或底物失效 | 通过混合酶标记物和底物，颜色应迅速显现来检查 | |
没有加入终止液 | 按照说明书实验操作步骤加入终止液 | |
超出读数时间读数 | 在说明书*的读数时间内读数 | |
样本值 | 不正确的样本储存方式 | 正确储存样本，使用新鲜样本进行实验 |
不正确的样本收集和处理方法 | 采取正确的样本收集和处理方法 | |
待测物质在样本中含量低 | 使用新鲜样本，重复实验 |
样品收集、处理及保存方法：
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品：
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项：
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，zui终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作，所有液体组分使用前充分摇匀。
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