小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA   试剂盒

包装规格：48T/96T

检测方法：酶联免疫

检测标本：血清、血浆、细胞培养液等

本试剂盒仅供体外研究使用!

试剂盒组成

需要而未提供的试剂和器材

• 酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) 。
• 洗板机（可调注液量，保证每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
• 超净工作台，生物安全柜，通风柜。
• 高精度单道加液器（量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
• 高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl).
• 37℃恒温箱。
• 低温离心机。
• 电冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.  漩涡混合仪，低频振荡器等

注意事项

• 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
• 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
• 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
• 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
• 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

6.   所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。

7.  各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。

8.  每次试验测定的同时做标准曲线，。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔zui高浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n）。

9.  配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，使用微量振荡器(使用zui低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。

10.  实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。

11.  手工洗板应注意：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA   试剂盒样本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存或根据存放，时间做相应温度调整，但应避免反复冻融，（由于样本种类过多，每个单位处理方式不一样，本说明书不做详细介绍）。

操作程序

• 标准品的稀释：（本试剂系统提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：

• 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
• 加样:(详细操作流程请客服索要说明书）
• 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
• 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
• 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
• 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
• 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

结果判断

1.  每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。（若不减零孔值，标准曲线的零孔应相交于Y轴） 

2. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。

3．手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。*使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。

4．若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

试剂盒性能

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9200。
2.  灵敏度：zui小可检测浓度达，1.05ng/ml。
3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5 . 回收率：70-110%.

6. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

7. 有效期：6个月

8. 检测范围： 480ng/ml -3.9ng/ml

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小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA   试剂盒 ELISA加样时的防错小经验：

（1）用一张写满字的纸，字越多越好，比如报纸，垫在下面，这样，加过标本的小孔看过去下面的字会变小，没加的字正常，非常容易区分。

（2）可以利用液面反光与没有加的孔加以区别

（3）在标本加完后，再把加样枪全压下，使液面产生小气泡，也可以加以区分

实验zui常见问题解答：

问：做间接Elisa法测试小鼠血清中的IgE抗体，设空白对照、和阴性对照、阳性血清稀释倍数为5千、1万、10万、20万不等，用的是*标记的羊抗鼠IgE抗体，和亲和素的辣根过氧化物酶。可是结果除了空白对照孔没有颜色外，其余各孔全有颜色，而且OD值都相差不大，为什么？

回答：可能原因如下：

（1） 水质被金属离子等污染；防止办法尽量使用新鲜水或蒸馏水。

（2） 洗涤不充分，样品中其它成分残留或酶残留；防止办法洗涤液应注满微孔，充分洗涤。

（3） 移液头重复使用，未洗净或消毒不*； 防止办法移液头一次性使用。

（4） 酶标板灵敏度过高。

（5） 一抗显色时间的控制等等，关于ELISA的每一步都要注意才行。

小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA   试剂盒问题解答：

若实验效果不好，请及时对显色结果拍照，保留所用板条及未使用试剂，并妥善保存，然后我公司为您解决问题。同时您也可以参考以下资料：

题解答