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进口检测试剂盒手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种,过程如下:
(1)浸泡式ELISA 洗涤:
a.吸干或甩干孔内反应液;
b.用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去);
c.浸泡,即将洗 涤液注满板孔,放置 1-2 分 钟,间歇摇动,浸泡时间不可随意缩短;
d.吸干孔内液体。吸干应*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸 上拍干;
e.重复操作 c 和 d,洗涤 3-4 次(或按说明规定)。
进口检测试剂盒在间接法中如本底较高,可增加洗涤次数或延长浸泡时间。 微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是 疏水性的,非离子型洗涤 剂既含疏水基团,也含亲水基团,其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合,从而削弱蛋白质与固相载体的结合,并借助于亲水基团 和水分子的结合作用,使蛋白质回复到水溶液状态,从而脱离固相载体。 洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温 20,其浓度可在 0.05%-0.2%之间,高于 0.2%时,可使包被在固相上的抗原或 抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
(2)流水冲洗式ELISA 洗涤,流水冲洗法zui初用于小珠载体的洗涤,洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置,使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗 ,持续冲洗 2 分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡 2 分钟,吸干即可。
浸泡式犹如盆浴,流水冲洗式则好比淋浴,其洗涤效果更为*,且也简便、 快速。已有实验表明,流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔表面,进口检测试剂盒洗涤效果更佳。
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