在免疫组化检测试剂盒中一般有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反响的完结需求有必定的温度和时刻，这一保温进程称为温育，有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。

      温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在树立ELISA方法作反响动力学研讨时，实验表明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1～2小时，产物的生成可达高峰。为加快反响，可进步反响的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为*，在放射免疫测定中多使反响在冰箱中过夜，以构成zui多的沉积。但因所需时刻太长，在ELISA试剂盒中一般不予选用。

     保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此刻可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性杰出的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，zui后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反响，操作时的室温应严厉约束在规则的范围内，规范室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求操控温育。室温温育时，ELISA试剂盒只要平置于操作台上即可。应留意温育的温度和时刻应按规则力求。为确保这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。