假使国产elisa试剂盒在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，人ELISA试剂盒虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。用化学方法制成的衍*-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成*标记产物，标记方法颇为简便。*与亲和素的结合具有很强的特异性，其亲和力较抗原抗体反应大得多，两者一经结合就极为稳定。

      因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时，ELISA试剂盒应注意可测范围的zui高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2，图1-4)，人ELISA试剂盒如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应(hook effect)，因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果