在TSZ elisa试剂盒操作过程中总是会呈现或大或小的问题,比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。今日上海莼试为咱们带来了一些实验经验总结,教您这样操作ELISA试剂盒实验不会失利。
1.有的包被原可能不是蛋白,关于*和脂类物质或小分子物质咱们要事前对其改造再加以包被,我把办法简明的列出如下:
2.亲和素*:先亲和素先包被载体,参加*化的DNA,这种包被办法均匀、结实,已扩展应用于各种抗原物质的定量测定。
3.应留心以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间 的作用,这种物理吸附长短特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易 吸附到固相载体外表。包被液的挑选,一般挑选ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于实验的需求,包被原的特殊性也可能选用中性的缓冲溶液来包。 具体的实验还要有坚固的理论外也要实践,看一下可不能够应用到自己实验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有 pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
4.在洗板时会有必定误差,人为因素很大(当然有条件的用洗板机在外),洗的不*或串了孔,对如斯敏捷的ELISA体系但是不小的影响。由于 聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为到达别离游离的和结合的酶符号物的意图,铲除残留在板孔中游离的物质,以及非特异性地吸附的干 扰物质,在洗刷时又应把这种非特异性吸附的搅扰物质洗刷下来。洗刷板:能够说在ELISA操作中,洗刷是zui首要的纽带技能。
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