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免疫组化检测试剂盒的实验流程:
脱蜡和水化
方法同SP法。
抗体的染色
1.将切片浸在3%H2O2甲醇溶液(新鲜配制)中10 min,PBS冲洗3 min×3次;
2.加100 ul(2滴)血清封闭溶液到切片上,室温孵育10 min,倒掉(不能冲洗);
3.加入一抗(按照说明书推荐浓度和孵育条件);
4.使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS),冲洗5 min×3次;
5.加入100 ul(2滴)*化的二抗,室温孵育10 min;
6.用TPBS冲洗5 min×3次;
7.加入100 ul(2滴)链霉亲和素-AP的二抗,室温孵育10 min;
8.用TPBS冲洗5 min×3次;
9.准备底物溶液:将1滴试剂4A和4B加入到1 ml去离子水中,充分混匀。再加入1滴试剂4C,充分混匀;
10.加100 ul(2滴)配好的AP底物溶液,室温孵育;
11.使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应。
第二抗体的染色
12.加100 ul(2滴)双染增强剂,孵育;
13.用TPBS冲洗3 min×3次;
14.加100 ul(2滴)血清封闭溶液到切片上,室温孵育10 min,倒掉(不能冲洗);
15.加入稀释好的一抗(按照说明推荐浓度和孵育条件);
16.用TPBS冲洗5 min×3次;
17.加入100 ul(2滴)*化的二抗,室温孵育10 min;
18.用TPBS冲洗5 min×3次;
19.加入100 ul(2滴)链霉亲和素-HRP的二抗,室温孵育10 min;
20.用TPBS冲洗5 min×3次;
21. 准备底物溶液:将1滴试剂6A和6B加入到1 ml去离子水中,充分混匀。再加入1滴试剂6C,充分混匀;
22、 加100 ul(2滴)配好的HRP底物溶液,室温孵育;
23.使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应;
24.使用复染试剂染色(根据需要选择);
25.封片剂封片,显微镜观察并拍照。
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