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上海莼试生物技术有限公司
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抗补体C3小鼠杂交瘤细胞；2A10实验方法和步骤
2024-7-31 阅读(49)
抗补体C3小鼠杂交瘤细胞；2A10实验方法和步骤:
(一) 前处理 用台称称量青蛙或蟾蜍的体重，然后按10微克／克动物体重的剂量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小时后，将动物处死，用剪刀剪开皮肤和肌肉，取出大腿骨和胫骨，剔净股骨上的肌肉，然后用一小块纱布来回搓干净。剪开两端股骨，用注射器（内装5ml 1％ 柠檬酸钠溶液）缓慢冲洗骨髓细胞到离心管中，经平衡后离心8分钟，速度为1000转／分钟。
(三) 低渗 吸去上清液，留沉淀物0.2ml，加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度，用吸管冲匀沉淀物，在恒温水浴(28℃)处理20分钟或更长一点时间。
(四) 固定 低渗后，以每分钟1000转速度离心10分钟。用吸管小心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，冲散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 冲匀后静止固定20分钟。重复固定1～2次，离心的速度与时间以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加4滴新配的固定液，冲匀沉淀物。从冰箱取出预先冷冻的载片，每片滴3滴细胞悬液，立即用嘴向载片上吹气，使细胞均匀分散，在酒精灯火焰上来回烤一下，以助染色体更好分散和展开。 (六) 染色 用10：1 Giemsa染液染色20分钟(Giemsa原液用PH＝6.8磷酸缓冲液稀释)，然后用水冲洗，片干后镜检。 (七) 镜检 在中倍镜下找染色体分散好的中期分裂相，转至高倍镜详细观察两栖类染色体的数目，属于大、中、小染色体各有多少条。
