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上海莼试生物技术有限公司
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NADP磷酸酶（NADPase）测定步骤
2021-7-7 阅读(430)
NADP磷酸酶（NADPase）测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）试剂四于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、200μL试剂四和40μL试剂五，混匀，记录600nm处20s时吸光值A1和1min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
NOX 活力单位的计算
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）NOX活力的计算:
单位的定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=2500×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/g鲜重）=ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.01÷T=505×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/104cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T=1.01×ΔA
V 反总：反应体系总体积，0.25mL；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，0.202mL；T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细胞或细菌总数，500万。
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