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上海莼试生物技术有限公司
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人Dectin-1蛋白ELISA检测试剂盒操作步骤
2021-9-28 阅读(167)
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。
人乳腺癌细胞；MCF 7B
人急性淋巴母细胞性白血病细胞；MOLT-4
人小细胞肺癌细胞；NCI-H209
黑人Burkitt淋巴瘤细胞；RAJI
人B淋巴细胞瘤细胞；RAMOS
人B淋巴细胞瘤细胞；RAMOS(RA.1)
人脑瘤细胞；SF126
人脑瘤细胞；SF763
人脑瘤细胞；SF767
人皮肤黑色素瘤细胞；SK-MEL-1
人肾上腺皮质癌细胞；SW-13
人结直肠癌细胞；T84
人急性单核细胞白血病细胞；THP-1
人神经胶质细胞瘤细胞；U251
人组织细胞淋巴瘤细胞；U937 [U-937]
人胃腺癌细胞；BGC-823
人低分化肺腺癌细胞；GLC-82 [GLC82]
人喉癌上皮细胞；Hep-2
人纤维肉瘤细胞；HT-1080
人绒癌细胞；JEG-3
人耐VP16绒癌细胞株；JEG-3/VP16
白介素-2转染耐VP16绒癌细胞；JEG-3/VP16-IL-2
TNFa转染耐VP16绒癌细胞；JEG-3-VP16-TNFa
人急性T淋巴细胞白血病细胞；Jurkat, Clone E6-1
人神经母细胞瘤细胞；BE(2)-M17
人乳腺癌细胞；MDA-MB-157
人成骨肉瘤细胞；MG-63
人小细胞肺癌细胞；NCI-H446
人多发性骨髓瘤细胞；RPMI-8226 [RPMI8826]
人脑瘤细胞；SF17
人乳腺癌细胞；SK-BR-3
人神经母细胞瘤细胞；SK-N-SH
人肝癌细胞；SMMC-7721
