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上海莼试生物技术有限公司
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小尾寒羊增食欲素(orexin)ELISA检测试剂盒操作步骤
2021-11-23 阅读(145)
小尾寒羊增食欲素(orexin)ELISA检测试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。
小鼠B淋巴细胞刺激因子(mouse BAFF)
小鼠凋亡因子BAX(mouse BAX)
小鼠细胞凋亡相关基因(mouse BCL-2)
小鼠脑衍化神经营养因子(mouse BDNF)
小鼠脑衍化神经营养因子受体(mouse BDNF R)
小鼠骨成型蛋白-2(mouse BMP-2)
小鼠骨成型蛋白-4(mouse BMP-4)
小鼠骨成型蛋白受体1A(mouse BMP-R1A)
小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(mouse BMP-R2)
小鼠脑钠肽(mouse BNP)
小鼠N端前脑钠素(mouse NT-proBNP)
小鼠骨唾液酸蛋白(mouse BSP)
小鼠CXCL3(mouse CXCL-3)
小鼠CXCR4(mouse CXCR-4)
小鼠皮质酮(mouse Corticosterone)
小鼠环氧化酶-2 (mouse COX-2)
小鼠结缔组织生长因子(mouse CTGF)