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上海莼试生物技术有限公司
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单胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）试剂盒技术参数
2020-3-13 阅读(173)
| 提 供 商 | 上海莼试生物技术有限公司 | 资料大小 | 12.3KB |
|---|---|---|---|
| 资料图片 | 下载次数 | 12次 | |
| 资料类型 | WORD 文档 | 浏览次数 | 173次 |
单胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）试剂盒说明书
测定意义：
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纤维化的程度。此外，MAO活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱，从而引发多种病症。
测定原理：
MAO催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸；底物在360nm处有特征吸收峰，测定360nm光吸收下降的速率，计算MAO活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体60mL×2瓶，4℃保存。
试剂二：液体2mL×1管，4℃避光保存。
粗酶液提取：
称取约0.1g样品，加1 mL预冷的提取液一充分冰浴匀浆，1000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1mL预冷的提取液二，震荡混匀，50000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1mL 试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）。
测定操作表：
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至360nm，对照管调零。
操作表
对照管
测定管
酶液（µL）
20
试剂一（µL）
180
160
试剂二（µL）
20
20
混匀，对照管调零，测定360nm处吸光值A1，然后37℃水浴60min，对照管调零，测定360nm处吸光值A2。ΔA=A1-A2
MAO活性计算公式：
1、按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每毫克蛋白质1min内转化1μmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（U/ mg prot）= ΔA÷1.46÷60×10÷Cpr = ΔA÷8.76÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：37℃，pH7.6时，每克样品1min内转化1μmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（U/ g）=ΔA÷1.46÷60×10÷W = ΔA÷8.76÷W
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。
注意事项：
1、吸光度变化应该控制在0.05～0.8之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2、样品蛋白质含量需要另外测定，可选用考马斯亮蓝法蛋白含量测定试剂盒进行测定。
