细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
公司产品仅用于科研以下是细胞的订购信息：

英文简称：NCI-H322细胞    

产品名称：肺癌细胞

规格：T25

形态特性：

生长特性：贴壁生长

特征特性：

培养条件：RPMI 1640 + 2mM Glutamine + 5-10% FBS

传代方法：1:2传代

货号：CS-X63768

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

注意事项：
（1）冻存前细胞状态，细胞在对数生，细胞密度适合，刚刚发生细胞融合，过密或连成片的细胞状态不好，而且消化时不容易分散；
（2）冻存的密度不宜过低，10的6次方-7次方的数量级比较好，我冻存的细胞一般T25培养瓶（5*107），一瓶冻一管（1.5ml冻存管），10cm培养皿（大概10的8次方个细胞）分成两管。
（3）消化和吹打，切忌消化过度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培养基吹打哦，不是加入冻存液再吹打。
（4）离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格，我从10%-90%都用过，问题不大，个人认为10%-20%可以了，能节约处就节约点嘛！另外，冻存液可以在处理细胞前配置，放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬，移入冻存管。
（5）关于“慢冻"，传统的方法，LLC细胞冻存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更长，-80度过夜，最后液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室，使用程序降温盒，内装异丙醇，在-80度并内可以逐渐降温，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
实验报告
一、产分离与培养：
   1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将成1mm3左右大小；
   2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
   3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
   4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
   5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
   1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
   2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
   4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
   5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
   6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
泡盛曲霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

栎生青霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

长柄链格孢拉丁属名: Streptomyces avermitilis

阿维菌素链霉菌拉丁属名: Salmonella typhimurium

鼠伤寒沙门氏菌用途: 试验栽培

黑木耳拉丁属名: Arthrobacter scleromae

硬结节杆菌拉丁属名: Metarhizium anisopliae

金龟子绿僵菌拉丁属名: Coprinus comatus

毛头鬼伞拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

酿酒酵母拉丁属名: Micromonospora sp.

小单孢菌拉丁属名: Nocardioides terrigena

土生类诺卡氏菌拉丁属名: Pachysolen  tannophilus

嗜鞣管囊酵母拉丁属名: Flammulina velutipes

金针菇（毛柄金钱菌、冬菇）拉丁属名: Streptomyces   sp.

链霉菌拉丁属名: Pseudomonas  protegens

假单胞菌拉丁属名: Arthrobacter     pascens
NCI-H322细胞肿瘤抑制因p53抗体黑升麻标准品试剂盒 BLACK COHOSH STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat

蛋白酶激活受体4抗体黑升麻标准品试剂盒 BLACK COHOSH STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat

原钙粘蛋白β5抗体橙标准品试剂盒 BITTER ORANGE (SYNEPHRINE) STANDARDS KIT(P)Human, Mouse

凋亡相关蛋白7抗体橙标准品试剂盒 BITTER ORANGE (SYNEPHRINE) STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat

调亡诱导因子家族蛋白PEF1抗体柑橘生物类黄标准品试剂盒 CITRUS BIOFLAVONOID STANDARDS KIT(SH)Bovine serum albumin

脂滴包被蛋白A+B抗体柑橘生物类黄标准品试剂盒 CITRUS BIOFLAVONOID STANDARDS KIT(SH)Human, Mouse

调亡诱导因子6相互作用蛋白/多巴受体相互作用蛋白4抗体越桔花青素标准品试剂盒 BILBERRY AGLYCONE ANTHOCYANIDINS STANDARDS KIT(P)Human, Mouse

小鼠抗莱克多巴单克隆抗体越桔花青素标准品试剂盒 BILBERRY AGLYCONE ANTHOCYANIDINS STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat

PDZ结构域PDZK9蛋白抗体越桔花青素标准品试剂盒 BILBERRY AGLYCONE ANTHOCYANIDINS STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat