细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
公司产品仅用于科研以下是细胞的订购信息：

英文简称：HS 578T 细胞    

产品名称：乳腺癌细胞

规格：T25

形态特性：上皮细胞

生长特性：贴壁生长

特征特性：Hs 578T是混合多边形形态，其中星状细胞类型被选择用于在通道和克隆。

培养条件：DMEM(高糖）+10%FBS

传代方法： 消化CQ-5分钟。1:2。3天内可长满。

货号：CS-X64049

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

注意事项：
（1）冻存前细胞状态，细胞在对数生，细胞密度适合，刚刚发生细胞融合，过密或连成片的细胞状态不好，而且消化时不容易分散；
（2）冻存的密度不宜过低，10的6次方-7次方的数量级比较好，我冻存的细胞一般T25培养瓶（5*107），一瓶冻一管（1.5ml冻存管），10cm培养皿（大概10的8次方个细胞）分成两管。
（3）消化和吹打，切忌消化过度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培养基吹打哦，不是加入冻存液再吹打。
（4）离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格，我从10%-90%都用过，问题不大，个人认为10%-20%可以了，能节约处就节约点嘛！另外，冻存液可以在处理细胞前配置，放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬，移入冻存管。
（5）关于“慢冻"，传统的方法，LLC细胞冻存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更长，-80度过夜，最后液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室，使用程序降温盒，内装异丙醇，在-80度并内可以逐渐降温，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
实验报告
一、产分离与培养：
   1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将成1mm3左右大小；
   2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
   3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
   4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
   5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
   1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
   2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
   4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
   5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
   6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
干扰素α(IFNα)检测试剂盒英文名称：IFNα ELISA Kit半蛋白酶抑制剂6抗体包装5g

肝脂酶(LIPC)检测试剂盒英文名称：LIPC ELISA Kit碳酸酐酶相关蛋白/脑蛋白10抗体包装1g

肝再生扩展生长因子(GFER)检测试剂盒英文名称：GFER ELISA Kit白介素-18受体α链抗体包装5g

肝素酶(HPA)检测试剂盒英文名称：HPA ELISA Kit转录阻抑蛋白CTCF抗体包装1g

肝素结合性表皮生长因子(HBEGF)检测试剂盒英文名称：HBEGF ELISA KitTCD1抗体包装25g

肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)检测试剂盒英文名称：HCⅡ ELISA Kit磷酸化周期检测点激酶2抗体包装5g

肝肾骨碱性磷酸酶(ALPL)检测试剂盒英文名称：ALPL ELISA Kit网格蛋白重链抗体包装1g

肝配蛋白B受体3(EPHB3)检测试剂盒英文名称：EPHB3 ELISA Kit透明质酸介导游走受体抗体包装100g

肝配蛋白B2(EFNB2)检测试剂盒英文名称：EFNB2 ELISA Kit2号染色体开放阅读框24抗体包装1g

肝癌源性生长因子(HDGF)检测试剂盒英文名称：HDGF ELISA Kit2号染色体开放阅读框60抗体包装250mg

肝X受体α(LXRα)检测试剂盒英文名称：LXRα ELISA Kit磷酸化周期素依赖性激酶7抗体包装25g

甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)检测试剂盒英文名称：GAPDH ELISA Kit磷酸化周期素依赖性激酶9抗体包装5g

甘露糖受体C2(MRC2)检测试剂盒英文名称：MRC2 ELISA Kit磷酸化周期检测点激酶1抗体包装5g

甘露糖受体C1(MRC1)检测试剂盒英文名称：MRC1 ELISA Kit磷酸化周期检测点激酶1抗体包装1g

甘露糖结合蛋白(MBL)检测试剂盒英文名称：MBL ELISA Kit磷酸化抑癌基因p16抗体包装250mg
HS 578T 细胞促状腺(TSH)检测试剂盒英文名称：TSH ELISA Kit腺苷酸环化酶10抗体包装5g

促黄体(LH)检测试剂盒英文名称：LH ELISA Kit腺苷酸环化酶5抗体包装25g

促红细胞生成素(EPO)检测试剂盒英文名称：EPO ELISA Kit腺苷酸环化酶6抗体包装5g

雌三醇(E3)检测试剂盒英文名称：E3 ELISA Kit腺苷酸环化酶9抗体包装5g

雌硫酸转移酶(SULT1E1)检测试剂盒英文名称：SULT1E1 ELISA Kit肌侧索硬化症相关蛋白2（2号染色体）抗体包装1g

雌(E)检测试剂盒英文名称：E ELISA Kit三磷酸腺柠檬酸裂解酶抗体包装5g

雌二醇受体(ER)检测试剂盒英文名称：ER ELISA Kitβ淀粉样蛋白前体结合蛋白B-1抗体包装25g

雌二醇(E2)检测试剂盒英文名称：E2 ELISA Kit内收蛋白a1抗体包装5g

垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)检测试剂盒英文名称：PACAP ELISA Kitα2纤溶酶色素上皮衍生因子抗体包装100ml

垂草扁桃酸(VMA)检测试剂盒英文名称：VMA ELISA Kit膜粘连蛋白7抗体包装25ml

穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)检测试剂盒英文名称：PF/PFP ELISA Kit早老素γ分泌酶抗体包装5ml

程序性死亡1(PD-1)检测试剂盒英文名称：PD-1 ELISA Kit钠ATP酶蛋白a1抗体包装100ml

成纤维细胞生长因子9(FGF9)检测试剂盒英文名称：FGF9 ELISA KitRho鸟苷酸交换因子2抗体包装25ml

成纤维细胞生长因子8(FGF8)检测试剂盒英文名称：FGF8 ELISA Kit磷酸化Rho鸟苷酸交换因子2抗体包装1g

成纤维细胞生长因子6(FGF6)检测试剂盒英文名称：FGF6 ELISA Kit去整合素样金属蛋白酶9抗体包装25g