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上海莼试生物技术有限公司
主营产品: ELISA试剂盒,ELISA试剂盒价格,ELISA试剂盒报价 |

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- 邮编:
参考价 | 面议 |
- 型号 50T
- 品牌 其他品牌
- 厂商性质 经销商
- 所在地 上海市
更新时间:2022-03-30 10:41:18浏览次数:313
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实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
参数规格:
产品名称:亨德拉病毒(EMV)PCR检测试剂盒
产品货号:CP99970
产品规格:50T
产品分类:荧光-PCR法
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
使用方法:
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意:DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线(以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头,从6号管中取5 μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头,从5号管中取5 μL溶液到4号管中,重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
高加索链霉菌β-乳球蛋白抗体Human HBA1 ELISA Kit小鼠钙结合蛋白(CR)免疫试剂盒
Salinicoccus alkaliphilusβ-乳球蛋白抗体Human HERPUD2 ELISA Kit小鼠钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)免疫试剂盒
Pilidium concavum缓激肽B2受体抗体Human HEATR4 ELISA Kit小鼠钙调素(CAM)免疫试剂盒
金顶侧耳(榆黄蘑)丁酰酯酶抗体(N端)Human HES5 ELISA Kit小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)免疫试剂盒
褐球固氮菌丁酰酯酶抗体(C端)Human HESX1 ELISA Kit小鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)免疫试剂盒
酿酒酵母BLAME抗体Human HEBP2 ELISA Kit小鼠肺炎支原体(MP)抗体(IgG)免疫试剂盒
竹喙球菌巴曲霉素单克隆抗体Human HEBP1 ELISA Kit小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)免疫试剂盒
酿酒酵母蛇巴曲酶抗体Human HECTD1 ELISA Kit小鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)免疫试剂盒
粉肉色杯伞溴脱氧尿苷抗体Human HECTD2 ELISA Kit小鼠肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)免疫试剂盒
越南芽孢杆菌肿瘤/抗原2.2抗体Human HECTD3 ELISA Kit小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)免疫试剂盒
肠球菌属肿瘤/抗原2.3抗体Human HELB ELISA Kit小鼠肺表面活性蛋白D(SP-D)免疫试剂盒
互生枝顶孢肿瘤/抗原2.4抗体Human HDAC5 ELISA Kit小鼠肥大类(MCT)免疫试剂盒
解拉乌尔菌脑钠素/利钠肽抗体Human HDAC4(Histone deacetylase 4) ELISA Kit小鼠肥大/干生长因子受体(试剂盒/Sl/CD117)免疫试剂盒
香菇B Raf抗体Human HDAC6 ELISA Kit小鼠芳香酶免疫试剂盒
腐皮镰孢菌癌易感基因1抗体Human HAUS3 ELISA Kit小鼠二酰基甘油(DAG/DG)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌癌易感基因2抗体Human HAX1 ELISA Kit小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)免疫试剂盒
亨德拉病毒(EMV)PCR检测试剂盒链霉菌Streptomyces│sp. 质量规格:含量测定脱氢酶7家族,成员A1试剂盒蒲公英甾;Taraxasterol
大肠埃希氏菌Escherichia│coli 质量规格:>98%,二水合物可用于培养糖还原酶试剂盒派立辛;Parishin
大肠埃希菌Escherichia│coli 质量规格:含量测定缩酶试剂盒欧夹竹桃苷;Oleandrin
苍白杆菌Ochrobactrum│pituitosum Huber et al. 质量规格:>98%,进分固酮试剂盒欧当归内酯A;Levistilide A
鸡伤寒沙门氏菌Salmonella│gallinarum 质量规格:>99%,BR去乙酰化酶Sirtuin-7试剂盒欧前胡素;Imperatorin
黑孢属菌种Nigrospora│sp. 质量规格:>99%去乙酰化酶Sirtuin-6试剂盒尼泊金异酯;Isopropyl 4-H
木霉Trichoderma│sp. 质量规格:HPLC>98%,标准品去乙酰化酶Sirtuin-5试剂盒尼泊金异丁酯;Isobutyl 4-Hy
产碱假单胞菌Pseudomonas│ 质量规格:>99%去乙酰化酶Sirtuin-4试剂盒膝甾酮;Lnokosterone
链霉菌属Streptomyces│sp. 质量规格:>99%,标准品去乙酰化酶Sirtuin-2试剂盒尿苷;Uridine