原代细胞VS细胞系：

用酶或机械方法直接从人或动物组织中分离出来的细胞。严格来说，从机体分离出来到传代之前的细胞称为原代细胞，绝大部分的原代细胞在体外可以分裂10-15次(这与细胞的端粒长短有关)，再加上取材，成本等因素，通常会把培养的第一代到第十代以内的细胞统称为原代细胞。

人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)

商品属性：

细胞简介：

人外周血DC分离自外周血，由外周血单核细胞诱导而成的；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。树突状细胞分为成熟树突状细胞和未成熟树突状细胞，典型的未成熟树突状细胞呈半贴壁生长，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串样集落，细胞大而形态不规则，表面皱褶多，亦可见少量短刺状突，胞内细胞器丰富并可见吞噬泡，具有较强的迁移能力，伴随有部分未诱导成的单核细胞，贴壁形态多样。而成熟的树突状细胞由未成熟DC进一步经TNFα、LPS等诱导而成，多数呈悬浮生长， 细胞呈圆形，细胞体积进一步增大，表面大量粗细不等的树枝样突起(高倍镜或者电镜下可观察到 )，伴随少量贴壁未成熟细胞或者单核细胞。未成熟DC细胞长时间培养也可能导致自发分化成熟。DC细胞尚无特异性细胞表面分子标志，主要通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。其中成熟树突状细胞表面高表达主要组织相容性复合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，进而激活T淋巴细胞，诱导免疫应答，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节；未成熟树突状细胞具有很强的抗原摄取加工能力，但由于缺乏多种共刺激分子不能使初始T细胞活化、增殖产生免疫应答，不能激活T细胞的信号，可导致T细胞无能，从而诱导免疫低反应或抗原免疫特异性耐受。未成熟树突状细胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ类分子等共刺激分子表达较低，一般在30%以下。

方法简介：

实验室分离的人外周血树突状(成熟DC)经CD86免疫荧光鉴定、细 胞 形态等综合鉴定，纯度可达80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

质量检测：

实验室分离的人外周血成熟DC采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来，细胞总量约为5×105cells/瓶。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：半贴壁半悬浮

细胞形态：圆形，树突状

传代特性：属于高度分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

原代细胞一般传至10代左右，大部分细胞衰老死亡，但是有极少数的细胞能够度过“危机"而继续传下去，存活的细胞一般能够传到40-50代，叫细胞株。当50代以后又会出现“危机"，这时有部分细胞的遗传物质发生了改变且带有癌变的特点，从而可能无限制地传代下去，称为细胞系。

也有认为细胞系指原代细胞培养物经传代成功后所繁殖的细胞群体。也指可长期连续传代的培养细胞。由此便引申出了后来的有限细胞系、无限细胞系，因此，细胞系狭义的是指可连续传代的细胞，广义是指可传代的细胞。而细胞株是通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的单一细胞称为细胞株。

细胞系具有容易培养、种类多、价格便宜、无限传代等优点，也非常容易在培养、冻存中发生错误鉴定及交叉污染的问题。

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CASP14重组人 Caspase-14 / CASP14 蛋白 (His 标签) Protein

ETHE1 Protein Human 重组人 ETHE1 / HSCO 蛋白 (His 标签)

CD3D & CD3E Protein Mouse 重组小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白

人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB 0.5mgNF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB) 细胞核因子50/κ基因结合核因子50抗原

ETHE1 Protein Human 重组人 ETHE1 / HSCO 蛋白 (His 标签)

IL17RD重组狗 IL17RD 蛋白 (His 标签) Protein

CD3D & CD3E Protein Mouse 重组小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白

CASP14重组人 Caspase-14 / CASP14 蛋白 (His 标签) Protein

原代细胞培养的具体步骤：

1、准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。

3、处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分钟。

5、消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6、分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500-1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。

7、计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2-7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。

8、培养：置于37℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。