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CCK-8实验方法

阅读:2216发布时间:2018-7-26

操作方法:

1. 在96孔板中配制100 μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时 (在37℃,5% CO2的条件下)。

2. 向培养板加入10 μl不同浓度的待测物质。如果测定细胞活性,则不需要2-3步骤,直接从第四步操作。

3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,  12, 24或48小时)。

4. 向每孔加入10 μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成气泡,它们会影响O.D值的读数)。

5. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

注意事项:

1)CCK-8试剂盒(货号:D3100L4057)的检测依赖于脱氢酶催化反应,如果待检测体系中有较多还原剂(或抗氧化剂)会造成背景O.D值升高,干扰检测结果。如果实验中有还原剂,请检查背景的O.D值,即测定、比较空白培养基加入药物与不加药物的培养基(含细胞)在加入CCK- 8试剂后的O.D值,如果空白O.D值明显偏高,则说明有反应,应设法去除或折算干扰因素。

2)如果细胞培养时间较长,培养基颜色发生变化,应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8检测。细胞培养基酚红不影响测定结果。

3)为使CCK-8试剂盒培养基充分混匀,减少CCK-8在移液器上的残留,建议加样前用培养基稀释CCK-8试剂,混匀后加样。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 


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