李记生物研发的Fast pfu酶较普通Pfu酶有更高的灵敏度和抗*力，在获得理想扩增效果的前提下，答复缩短了扩增时间，非常适合1-20kb的长片段扩增。Lj 2 x fast pfu Master Mix是将PCR反应所需的Fast pfu Taq酶、dNTPs 、MgCL2以及反应提冲液预先配制成2倍浓度的混合物。本试剂专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1x 10-6。

详细介绍

Lj 2 x fast pfu Master Mix

订购信息

产品名称	货号	规格	保存	价格(元)
Lj 2 x fast pfu Master Mix	D1010L1185	1ml	-20℃	150

李记生物研发的Fast pfu酶较普通Pfu酶有更高的灵敏度和抗*力，在获得理想扩增效果的前提下，答复缩短了扩增时间，非常适合1-20kb的长片段扩增。本制品是将PCR反应所需的Fast pfu Taq酶、dNTPs 、MgCL2以及反应提冲液预先配制成2倍浓度的混合物。2 xFast Pfu Master Mix 专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1x 10-6，较普通Taq酶低100倍，较普通pfu酶低10倍。使用时只需加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，大大地简化了操作过程，减少了PCR操作过程中的污染。

运输与保存方法

冰袋运输，收到货后-20℃避光干燥保存，避免反复冻融，保存条件下1年有效。

使用方法

常用反应体系

常用PCR程序

2 x Lj fast pfu Master Mix上游引物

下游引物

模板

ddH2O

25 μL

0.2-1.0μM(终浓度)

1-50ng（质粒）

10ng-1μg（基因组）

至50μL

扩增片段<3k

扩增片段≥3k

94℃ 90sec

94℃ 20s

30次循环 57-60℃ 20s

72℃ 1kb/30s

72℃ 5min

4℃ 保温

94℃

30次循环

72℃

4℃

5min

94℃ 5s

68℃1kb/30s

5min

保温

使用建议

Fast pfu DNA 聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3’端“A”突出。PCR产物克隆方案有：

1） PCR前引物进行5’端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。

2）将产物3’末端加A后再与T载体链接。

3）由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3’端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少有3’-5’外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系。

注意事项

1. 需溶解*后使用，防止离子浓度不均匀。

2. 对高GC含量模板，建议将变性温度提高到98℃。

3. 对于高GC模板，建议添加终浓度为5%-8%DMSO。

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