Blood Taq DNA聚合酶（免提取）来源于携带有突变的Taq DNA 聚合酶基因的E. coli 菌株，是截短后的Taq DNA聚合酶，缺失了N端的 5´结构特异性核酸内切酶结构域，缺失了N端的280个氨基酸；此外其基因内部发生了三个点突变。这些突变使它能够耐受全血中存在的抑制剂, Blood Taq DNA聚合酶其他性能与常规Taq DNA聚合酶没有较大差异。

详细介绍

Blood Taq DNA聚合酶（免提取）

产品名称	货号	规格	保存	价格(元)
Blood Taq DNA聚合酶（免提取）	D1010L1179	200 tests	-20℃	550

产品描述

Blood Taq DNA聚合酶来源于携带有突变的Taq DNA 聚合酶基因的E. coli 菌株，是截短后的Taq DNA聚合酶，缺失了N端的 5´结构特异性核酸内切酶结构域，缺失了N端的280个氨基酸；此外其基因内部发生了三个点突变。这些突变使它能够耐受全血中存在的抑制剂, Blood Taq DNA聚合酶其他性能与常规Taq DNA聚合酶没有较大差异。此酶能够扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先提纯。Blood Taq DNA聚合酶在25 µL反应体系中能够耐受高达20%的全血（50 µL反应体系中耐受30%）。

Blood Taq DNA聚合酶较其他同类产品单位活性高，单位反应成本低。

使用 Blood Taq DNA聚合酶扩增人全血。1:5%血液+Na-EDTA；2:5%血液+K-EDTA；3:5%血液+ Na-肝素；4:5%血液+Na-柠檬酸；5:含有人干血的1mm2 FTA GutherieCard；6:含有人干血的1mm2 FTA Card（50 µL水洗）。

运输与保存方法

冰袋运输。收到货后-20℃避光干燥保存，1年有效。

使用方法

1. 反应体系配制。各组分在冰上*融化、混匀，按照下表进行加样:

组分	25 µL	50 µL	终浓度
5X Bloot Taq Reaction Buffer	5 µL	10 µL	1X
10 mM dNTP	0.5 µL	1 µL	0.2 mM
10 µM Forward Primer	0.75 µL	1.5 µL	0.3 µM (0.05-1 µM)
10 µM Reverse Primer	0.75 µL	1.5 µL	0.3 µM (0.05-1 µM)
Whole Blood	up to 2.5 µL*	up to 10 µL**
Blood Taq DNA	2 µL	4 µL
Nuclease-free H2O	to 25 µL	50 µL

* ≤10% Recommended in 25 µL reaction volume. ** ≤=20% Recommended in 50 µL reaction volume.

2. 加血液样品。先将其它组分用移液器上下混匀，然后将血液加在管子底部。

3. 将PCR管转移至95°C预热的PCR仪，开始循环。

注：若反应体系中包含>10%的血液，*用50 µL 反应体系。

4. PCR反应。*PCR程序：通常为30-40个循环：

步骤	温度	时间
Initial Denaturation	95°C	3 minutes
30-40 Cycles (Typically 35)	95°C 50-68°C 68°C	20 seconds 30 seconds 2minutes per kb
Final Extension	68°C	10 minutes
Hold	4-10°C

注意事项

1. DNA 模板: 全血样品*用*、Na-EDTA、K-EDTA或者柠檬酸钠处理，虽然Blood Taq DNA聚合酶可以耐受30%（v/v）的全血样品，但为了达到*扩增效果,5%–10%为建议的理想样品量。干血如果存放在Guthrie卡或者903卡上(Whatman, NJ)，可以直接在25µL反应体系内加入1mm punch disc。如果血液存放在FTA paper (Whatman, NJ), 则先把 1mm punch disc在50µL dH2O中,50°C条件下孵育5分钟，然后弃去50µL dH2O，把disc 直接放入25或50µL PCR 反应体系中。

2. 引物：理想引物长度在20–30个核苷酸，GC含量40–60%。可用计算机软件辅助进行引物设计，诸如PrimerSelect™(DNAStar Inc, Madison, MI)或者Primer3 (http://frodo.wi.mit.edu/primer3)等软件在引物设计和分析时均表现良好。每个引物在反应体系中的终浓度为0.05–1μM, 0.3μM时表现更佳。

3. dNTPs: 每种dNTP*浓度为200 µM。

4. 冷敏感: Blood Taq DNA聚合酶增加了冷敏感性，包含部分热启动酶（Hot Start Taq）的特点，将反应体系至于冰上操作，并迅速置于95°C预热的PCR仪可以将非特异性扩增降至zui低。

5. 变性温度和时间: 在正式开始PCR循环前，*行95°C，3分钟的预变性，可以确保血细胞得到充足裂解并释放出DNA模板。

6. 退火温度和时间: *退火时间持续30秒到1分钟，退火温度可以通过梯度PCR进行优化。梯度PCR时，退火起始温度低于计算出melting temperature (Tm)5°C。

7. 延伸时间: *延伸温度为68°C，zui后的延伸程序*为10分钟，68°C。Blood Taq DNA聚合酶延伸速度为500bp/min.

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