海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒（药物筛选）
产品名称 | 货号 | 规格 | 保存 | 价格(元) |
海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒（药物筛选） | R1525L3001 | 1 plate | -20℃ | 2450 |
产品描述
海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit)以肠腔素(Coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla reniformis luciferase，简称renilla luciferase)活性的试剂盒。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化Coelenterazine氧化成Coelenteramide。在Coelenterazine氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)进行测定。
海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒(Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit)提供了一种快速、灵敏、高效的检测目的基因表达的系统，该表达系统不依赖ATP。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建表达系统。用适当药物等处理细胞后，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因转录、表达的调控作用。海肾萤光素酶一方面常用作萤火虫萤光素酶报告基因检测的内参，以消除由于质粒的转染效率不同而带来的误差；另一方面海肾萤光素酶也可以和萤火虫萤光素酶一样被用于常规的报告基因检测。
技术原理
Coelenterazine + O2 → Coelenteramide + CO2 + Light (~ 480 nm)
产品包装
组分 | R1525L3001 | R1525L3010 | R1525L3100 |
组分A: 100X Luciferase Substrate (避光) | 1管（100 µL） | 1管（1 mL） | 10管（1mL/管） |
组分B: 试剂盒缓冲液 | 1瓶（10 mL） | 1瓶（100 mL） | 10瓶（100 mL/瓶） |
使用方法
1. 准备细胞
1.1 贴壁细胞: 细胞生长培养基过夜培养，使细胞密度达到1,000 -10,000 个/90 µL/孔 (96孔板) 或 250-2,000个/20 µL/孔 (384孔板).
1.2 悬浮细胞：离心细胞培养液，然后用细胞培养基重悬细胞，使细胞密度在多聚D-赖氨酸96孔板达到20,000-200,000 个/90 µL/孔或5000-50,000个/20 µL/孔（多聚D-赖氨酸384板）。反应前800 rpm离心96孔或384孔板2分钟。
注意: 1）不同的细胞处理需要不同的细胞密度，在反应前一天或实验当天细胞制备，要考虑细胞类型和细胞处理。
2）建议使用白色96孔板或384孔板以获得*结果。
3）建议使用没有酚红的培养基，EMEM, MEM会吸收luciferases发出的光线，淬灭要观察的光信号。
2. 准备Renilla luciferase试剂盒反应液 按照1:100体积比，将荧光素酶底物（组分A）加入缓冲液（组分B）。
注意：Renilla luciferase试剂盒反应液对光线非常敏感，操作中应避光，并全程在冰上操作，配好后在2小时内使用。暂时不用应避光放置于-20℃保存，存放时间1周左右。
3.处理细胞：
3.1 步骤1准备好的细胞，96孔板每孔加入10µL 的10X 待测化合物溶液（药品或化合物），如果是384孔板，则每孔加入5 µL的5X化合物溶液。
3.2 加入化合物的细胞在37℃, 5% CO2条件下根据化合物作用要求培养一定时间，一般为4小时或过夜培养。
4. Renilla luciferase检测
4.1 步骤3.2培养的细胞，*移除细胞培养液
4.2 去除培养液的96孔板，每孔加100 µL Renilla luciferase反应液（步骤2配制），如果是384孔板则每孔加入25 µL。室温、避光孵育反应5-10分钟。
4.3 检测 用化学发光仪(luminometer)进行光密度测定。
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| 产品名称 | 货号 | 规格 | 保存 | 价格（元） |
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