上海邦景实业有限公司
主营产品: 进口elisa试剂盒,细胞株,细胞系,菌种 |
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更新时间:2022-09-02 13:39:17浏览次数:121
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操作流程:
1待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
2酶标板置4℃,包被过夜。
3洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后,即甩去,之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
4阴性对照孔每孔加入pbs 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
5酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
6洗板,同4。
7每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
8酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
9洗板,同4。
10每孔加tmb显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。
12分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,终测得的od值为两者之差w1-w2,以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
13数据处理:在得出标本s和阴性对照n的 od值后,计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。
产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
NO人一氧化氮检测试剂盒 | NO ELISA Kit | 48T/96T | BJ-E2000 |
试剂盒组成及试剂配制:
1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
试剂和样本的控制方法:
一、试剂
1.试剂的选择:国家明确要求要采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关,我司严格按照国家标准进行,已获得国家承认的“三证",每一个产品都有对应的批号,只要客户提前下单,我们就能为您提供新批次的产品,不必担心会有过期的试剂。我司的试剂,值得您选择。
2.试剂的准备:先将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20-30 min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度,以满足后面的测定需求。
二、样本
1.内源性干扰因素:包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等;
类风湿因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理;
③检测抗原时,可用加入到标本稀释液中使RF降解。
ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。
兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)试剂盒 5'-Deoxy-5-fluorocytidine 中文名: 分子式:C9H12FN3O4
兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140) 5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid 24065-33-6 中文名: 分子式:C5H3ClO2S 度:98.0% 关键词:
兔性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF) 6-Hydroxyrubiadin 中文名:6-羟基甲基异茜草素 分子式:C15H10O5 度:97.5%
兔性血友病因子(rabbit VWF) 作用: 规格: 48T/96T 进口分装 5-Chloro-2-nitrobenzoic acid 中文名: 分子式:C7H4ClNO4 度:98.0%
兔细胞粘附分子-1(rabbit VCAM-1) 作用: 规格: 48T/96T 进口分装 5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile 147619-40-7 中文名: 分子式:C7H5ClN2O2 度:98.0% 关键词:
二甲基亚砜(Standard for GC,≥99.95%(GC)) Dimethyl sulfoxide 质量规格:Standard for GC,≥99.95%(GC) Mouserudimealbovineserumalbumincheck-up试剂盒小鼠的牛血清白蛋白残留检测试剂盒
正癸醇(Standard for GC,≥99.5%(GC)) n-Decyl alcohol 质量规格:Standard for GC,≥99.5%(GC) 小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)试剂盒 ,英文名: G-CSF
琥珀酸二乙酯(standard for GC,≥99.6%(GC)) Diethyl succinate 质量规格:standard for GC,≥99.6%(GC) 大鼠环0酸腺苷(cAMP)检测试剂盒Ratcyclicadenosinemonophosphate,cAMP
癸二酸二乙酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC)) Diethyl sebacate 质量规格:Standard for GC, ≥99.5% (GC) 人低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP-4)抗体(IgG)试剂盒 Human LRP-4 IgG
二十二烷(standard for GC,≥99.0%(GC)) Docosane 质量规格:standard for GC,≥99.0%(GC) RatN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNP大鼠N端前脑素(-proBNP)试剂盒
三十二烷(standard for GC,≥98.0%(GC)) Dotriacontane 质量规格:standard for GC,≥98.0%(GC) FAM蛋白标记试剂盒3(200微克/)
正庚醇(Standard for GC,>99.5%(GC)) 1-Heptanol 质量规格:Standard for GC,>99.5%(GC) MousesecretoryimmunoglobulinA,sIgA试剂盒小鼠分泌型球蛋白A(sIgA)试剂盒
γ -丁内酯(GBL)(standard for GC,≥99.9%(GC)) 4-Hydroxybutanoic acid lactone 质量规格:standard for GC,≥99.9%(GC) 小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF) 试剂盒
丙位庚内酯(Standard for GC ,>98.5%(GC)) γ-Heptalactone 质量规格:Standard for GC ,>98.5%(GC) Rat ciliary neuroophic factor (CF) 大鼠睫状营养因子(CF)试剂盒
(+)-葑酮(standard for GC, ≥99.5% (GC)) (+)-Fenchone 质量规格:standard for GC, ≥99.5% (GC) Humanneuophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL 人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)试剂盒 进口分装
鱼金属硫蛋白2(MT-2)elisa检测试剂盒
NO人一氧化氮检测试剂盒小鼠多巴胺(DA)elisa检测试剂盒
小鼠多巴胺(DA)elisa分析检测试剂盒
小鼠多胺氧化酶(PAOX)elisa检测试剂盒
小鼠对氧磷酶2(PON2)elisa检测试剂盒
小鼠对氧磷酶1(PON1)elisa检测试剂盒
注:本公司提供试剂盒免费代测服务。需要其他Elisa试剂盒请咨询销售人员。产品仅用于科研