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青岛捷世康生物有限公司
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阅读：1759发布时间：2019-3-6
抗坏血酸（Vc）测试盒说明书
一、试剂盒组成及配置（50T/48样)
试剂一：贮备液5mlx1瓶，4℃保存6个月。
试剂一应用液配制：用时按照试剂一贮备液：双蒸水=1:14稀释，混匀制备
试剂二：粉剂x1支，4℃保存6个月。
试剂二应用液配制：用时一支粉剂加0.36ml冰醋酸再加水至40ml，
溶解，4℃保存。
试剂三：白色结晶体粉剂x1支，4℃保存6个月。
试剂三应用液配制：因胶南溶解，用前2-4小时加95%乙醇或无水乙
醇60ml充分溶解，制备，4℃保存。
试剂四：黄色贮备液0.2mlx1瓶，冰箱4-8℃避光保存，贮存时间6个月。
试剂四应用液配制:用时取0.15ml试剂贮备液加水至25ml制备。现用现配
试剂五：液体6mlx1瓶，4℃保存6个月。
试剂六：Vc标准品：粉剂6mgx3支，每瓶内含*，4℃保存6个月。
60ug/ml Vc标准品应用液的配制：将1支标准品粉剂溶于10ml试剂一应用液中，制备。
6ug/ml Vc标准品应用的配制：取60ug/ml Vc标准品应用液再用试剂
一应用液10倍稀释备用，现用现配。
注：*标准品易氧化，因此在样本上清液制备好后在配标准，并在10分钟内进行检测。
二、操作过程：
1、上清液制备：取样本0.15ml加1号试剂0.45ml，旋涡混匀，放置15分
钟后离心，3500～4000转/分，离心10分钟，上层清亮液体为上清液。
2、上清液中Vc的测定：
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | ||||
| 试剂一（mL） | 0.4 | |||||
| 6ug/ml Vc标准应用液（ml） | 0.4 | |||||
| 上清液（ml） | 0.4 | |||||
| 试剂二应用液（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 | |||
| 试剂三（ml） | 1 | 1 | 1 | |||
| 试剂四（ml） | 0.25 | 0.25 | 0.25 | |||
| 充分混匀，37℃水浴30分钟 | ||||||
| 试剂五 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | |||
充分混匀，静置10分钟，波长636nm,1cm或者0.5cm光径，双蒸水凋零，测定各管吸光度值。
三、计算公式：
1、血清（浆）的计算与举例：
①、计算公式：
②、计算举例：
例1：取血清0.15ml，按操作表操作，测得空白管OD为0.031，标准管OD为0.184，测定管OD为0.144，则计算结果为：
2：组织的计算与举例：
①、计算公式：
②、计算举例：
例1: 取 10%大鼠肝匀浆0.15ml，按操作表操作，测得空白管OD为0.032，标准管OD为0.184，测定管为OD为0.146，同时测得10%大鼠肝匀浆蛋白浓度为8.5mgprot/ml。
则计算结果为：
例2：取20%轮虫匀浆0.15ml，按操作表操作，测得空白管OD为0.031，标准管为OD为0.186，测定管为0.177，同时测得20%轮虫匀浆蛋白浓度为0.8537mgprot/ml。则计算结果为：
四、测定原理：
本法对Fe与还原性抗坏血酸迅速作用生成Fe，后者在于菲罗啉显色反应，可以测定血浆中*的含量。
五、测定的意义：
*在体内参与胶原物质合成，是*羟化酶和赖氨酸羟化酶的辅因子，是催化多巴胺转变成去甲肾上腺的铜酶多巴β羟化酶所必需，当*缺乏时，合成的胶原得不到充分的羟化，不能很好的形成纤维。
*明显的化学活性是作为还原剂，他可以将Fe还原成Fe，促使铁在肠道吸收，促进铁的贮存和利用。
抗坏血酸作为自由基清除剂，可以很快地与O,反应，更快地与反应生成抗坏血酸自由基，它也可以清楚O，因此，抗坏血酸可以保护机体免受内源性氧自由基的损伤。
*能与α-生育酚自由基还原成*，间接的起着链阻断剂作用。
*是血浆中有效的抗氧化剂，是细胞外液抗氧化防御系统的道防线，Vc对血浆中正在进行着脂质过氧化作用也有阻断作用。
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