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上海联迈生物工程有限公司
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暂无信息 |
Rat LIGHT ELISA Kit
规格： 96T
检测范围： 93.8pg/ml→6ng/ml。
敏感性： ＜10pg/ml
特异性： 系统和其它细胞因子无交叉反应。
保存： 2-8℃（频繁使用时）；-20℃（长时间不用时）。
有效期： 6 个月（4℃）；12 个月（-20℃）。
用途： 用于体外定量分析大鼠血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清。
Rat LIGHT ELISA Kit
规格： 96T
检测范围： 93.8pg/ml→6ng/ml。
敏感性： ＜10pg/ml
特异性： 系统和其它细胞因子无交叉反应。
保存： 2-8℃（频繁使用时）；-20℃（长时间不用时）。
有效期： 6 个月(4℃)；12 个月（-20℃）。
用途： 用于体外定量分析大鼠血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清。
Rat LIGHT ELISA Kit工作原理
LIGHT／TNFSF14 是近年来发现的肿瘤坏死因子超家族成员，具有共刺激 T 淋巴细胞、诱导 iDC
成熟、促进肿瘤细胞凋亡的生物学功能，在自身免疫病、移植物抗宿主病（GVHD）及抗肿瘤免
疫中发挥重要的调节作用。人的 LIGHT 基因可编码 240 个氨基酸，包含一个位于 N 端由 37 个
氨基酸组成的胞内区，一个位于 C 端由 181 个氨基酸组成的胞外区和一个由 22 个疏水氨基酸组
成的跨膜区。
所提供的大鼠 LIGHT ELISA Kit 是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。预先包被的抗体和检测相抗体都是近 100%纯度的亲和纯
化多克隆抗体。检测相抗体经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔
反应后，PBS 或 TBS 洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过 PBS 或 TBS 的*洗
涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的
黄色。颜色的深浅和样品中的 LIGHT 呈正相关。
内容 | 规格 | 数量 |
预包被抗LIGHT 抗体的 96 孔板 | 96T | 1 |
冻干标准品 | 10ng/管 | 2 |
生物素标记 | 130ul | 1 |
亲和素-过氧化物酶复合物 | 130ul | 1 |
样品稀释液 | 30ml | 1 |
抗体稀释液 | 12ml | 1 |
ABC 稀释液 | 12ml | 1 |
TMB 显色液 | 10ml | 1 |
TMB 终止液 | 10ml | 1 |
洗涤缓冲液(25X) | 20ml | 1 |
封板膜 |
| 2 |
说明书 |
| 1 |
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪。
2. 自动洗板机。
3. 恒温箱
4. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器。
5. 干净的试管和 Eppendof 管。
6. 用去离子水将 25X 洗涤缓冲液稀释 25 倍，成 1X 洗涤缓冲液。
注意事项
1． 使用前 TMB 显色液应为无色透明溶液，若发现颜色异常，请及时与厂家。
2． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
3 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。
4． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
5． 禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。
6. 本公司提供的 96 孔酶标板是单条可拆型酶标板，用户可按需求使用；剩余的酶标板请
按保存条件贮存。
7. 揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将 1X 洗涤缓冲液至少 300ul 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
样品的准备和保存
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
细胞培养上清——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固 30 分钟，离心 1500×g 15 分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血浆—在冰块上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分钟内离心 1500×g 15 分钟。血浆在 2-8℃进一步离心 10000×g 10 分钟，以*清除血小板。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞裂解液——对于贴壁细胞，去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常 10 秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打把细胞吹散，用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后，10000—14000g 离心 3-5 分钟，取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
样品稀释的一般原则
用户须估计样品待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA 试剂盒的*检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同，分别采取不同的
稀释方案：
高——指待测因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀释。297ul 样品稀释液加 3ul 样品。
中——指待测因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀释。225ul 样品稀释液加 25ul 样品。
低——指待测因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀释。100ul 样品稀释液加 100ul 样品。
特低——指待测因子≤31.2pg/ml。样品一般不做稀释，或按 1：2 稀释。
操作程序总结：
1． 加样品和标准品，37℃反应 90 分钟。不洗。
2． 加生物素标记抗体，37℃反应 60 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 3 次。
3． 加 ABC，37℃反应 30 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 5 次。
4． TMB37℃反应 15-20 分钟。
5． 加入 TMB 终止液，读数。
人 分泌成分 SC secretory component
人 分泌型卷曲相关蛋白5 sFRP-5 secreted frizzled-related protein 5
人 分泌型磷脂酶A2 sPLA2 secreted phospholipase A2
人 分泌型免疫球蛋白A sIgA secretory immunoglobulin A
人 酚氧化酶 PO Phenoloxidase
人 粉尘螨特异性IgE抗体 s-IgE specific IgE against dust mite
人 封闭蛋白1 Claudin-1 Claudin-1
人 封闭蛋白2 Claudin-2 Claudin-2
人 封闭抗体 BA Blocking antibody
人 父系表达基因10 PEG10 paternally expressed 10
人 附睾蛋白4 HE4 epididymis protein 4
人 附睾分泌蛋白4 HE4 epididymis protein4
人 富含半胱氨酸蛋白61 Cyr61 cysteine-rich 61
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