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上海联迈生物工程有限公司
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高效E.coli感受态细胞制备试剂盒本试剂盒是基于Inoue方法的、高效快速E.coli感受态细胞制备试剂盒。本产品具有下列特点：
1. 一步式操作，离心后重悬细胞即可，非常简单。
2. 转化率高，转化效率一般都在10E8/ug质粒以上。
高效E.coli感受态细胞制备试剂盒
名称 | 规格 | 价格 | 手册 |
高效E.coli感受态细胞制备试剂盒 | 20次 | 询价 |
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本试剂盒是基于Inoue方法的、高效快速E.coli感受态细胞制备试剂盒。本产品具有下列特点：
1. 一步式操作，离心后重悬细胞即可，非常简单。
2. 转化率高，转化效率一般都在10E8/ug质粒以上。
3. 重复性好，可用于各种E.coli菌种，包括K12系（如JM109、DH5a等）和B系（如BL21系列菌种）。
4. 适用于低、中、高拷贝的各种质粒。
5. 本试剂盒足够20次制备，每次可以制备可以用50 mL菌液制备80管感受态细胞。所得感受态细胞在-80℃至少可以保存半年以上。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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