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上海联迈生物工程有限公司
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天净沙甲基化PCR 2.0试剂盒本产品是甲基化专一性PCR试剂盒（CAT#:100923）的升级版，其亚硫酸氢盐DNA修饰试剂盒（CAT#:100922）的升级版，亚硫酸氢盐修饰DNA时要求DNA必须在单链状态，反应还必须在低温进行，常规的修饰试剂盒由于是在液相进行，要在低温下让DNA不相互复性而保持单链状态非常棘手，所以常规修饰试剂盒的修饰效率一般都不高。此外，常规方法要切换反应液，有多次沉淀步
天净沙甲基化PCR 2.0试剂盒
名称 | 规格 | 价格 | 手册 |
天净沙甲基化PCR 2.0试剂盒 | 150次 | 询价 |
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本产品是甲基化专一性PCR试剂盒（CAT#:100923）的升级版，其亚硫酸氢盐DNA修饰试剂盒（CAT#:100922）的升级版，亚硫酸氢盐修饰DNA时要求DNA必须在单链状态，反应还必须在低温进行，常规的修饰试剂盒由于是在液相进行，要在低温下让DNA不相互复性而保持单链状态非常棘手，所以常规修饰试剂盒的修饰效率一般都不高。此外，常规方法要切换反应液，有多次沉淀步骤，使得DNA的回收率一般都不超过50%。为克服这些缺点，本公司开发出了此升级产品，它具有下列特点：
1． 用包埋的样品进行所有操作，免去所有沉淀和纯化步骤，极大简化了操作。
2． 免去了DNA提取过程，所需实验材料比常规方法更少，少几个细胞都可以，极大地节约了宝贵材料，尤其适用于*材料。
3． 包埋处理后，DNA在整个操作过程中都处于适于修饰的单链状态，极大提高了修饰效率。
4． DNA包埋于包埋块中，切换反应液非常方便，而且DNA不会丢失，所以终回收率都在90%以上。
5． 适用于实体材料、悬浮细胞和纯化好的DNA样品。
6． 本试剂盒提供的甲基化修饰试剂盒足够制备150多个10uL包埋块（如果用纯化好的DNA）或25个10uL包埋块（如果用悬浮细胞）；本试剂盒提供的PCR试剂盒足够180次100uL体系的PCR反应。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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