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上海联迈生物工程有限公司
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Tth DNA聚合酶本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下，具有DNA多聚酶活性。它与Taq酶一样被广泛用于PCR反应，但耐热性比Taq酶高，因此对高GC含量模板的PCR也有较好的效果。本酶基本上没有3'→5'外切酶活性及5'→3'外切酶活性，所以也可用于双脱氧法测序。另外，本酶具有RTase 活性，在Mn2+存在的情况下，RTase
Tth DNA聚合酶
名称 | 规格 | 价格 | 手册 |
Tth DNA聚合酶 | 250U | 询价 |
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本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下，具有DNA多聚酶活性。它与Taq酶一样被广泛用于PCR反应，但耐热性比Taq酶高，因此对高GC含量模板的PCR也有较好的效果。本酶基本上没有3'→5'外切酶活性及5'→3'外切酶活性，所以也可用于双脱氧法测序。另外，本酶具有RTase 活性，在Mn2+存在的情况下，RTase活性会得到强化。利用该特性，可以用来在同一管中进行逆转录反应和PCR反应，即一步法RT PCR。（但是，在Mn2+存在时，RT-PCR的准确性不高）此外，本酶与Taq DNA多聚酶一样，PCR产物可通过T载体进行TA克隆。它具有下列特点：
1. RT-PCR反应的特异性增加：在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性。
2. 二级结构减少：在较高的温度下进行逆转录，减少了由于RNA二级结构引起的问题。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相， 离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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