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Phusion DNA聚合酶

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更新时间：2018-06-20 14:14:03浏览次数：872次

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产品简介

Phusion DNA聚合酶本产品是Phusion DNA Polymerase基因经过原核表达，并经多次纯化分离得到。该酶是由高保真Pfu DNA聚合酶和*的双链DNA结合蛋白Sso7d融合而成，它具有下列特点：
1. *的DNA持续合成能力，合成DNA能力分别是Pfu DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶的10倍和2倍。

详细介绍

名称	规格	价格	手册
Phusion DNA聚合酶	100 U	1198元

本产品是Phusion DNA Polymerase基因经过原核表达，并经多次纯化分离得到。该酶是由高保真Pfu DNA聚合酶和*的双链DNA结合蛋白Sso7d融合而成，它具有下列特点：
1. *的DNA持续合成能力，合成DNA能力分别是Pfu DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶的10倍和2倍。
2. 快速，相比常用的DNA聚合酶，合成时间大大缩短，延伸速率为15-30s/kb。
3. 可以短时间内高效、高保Phusion DNA聚合酶真扩增长片段DNA，长可以扩增20Kb。
3. 具有5’-3’和3’-5’核酸外切酶活性，是目前保真度的热稳定性聚合酶，保真性是Taq DNA聚合酶的50倍, Pfu DNA聚合酶的6倍。
4. 扩增的PCR产物为钝端双链DNA，不能直接用于AT克隆。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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